草鱼Ajuba蛋白在草鱼呼肠孤病毒感染CIK细胞过程中的表达及功能探讨
发布时间：2022-01-24 01:02
Ajuba属于LIM蛋白第三类中的Zyxin蛋白家族,含有双锌指结构的LIM结构域,其主要作用是参与蛋白质之间的相互作用。Ajuba影响着生物体生长发育的基本过程——有丝分裂,调控细胞周期;是细胞骨架相关蛋白,参与细胞粘附及细胞间的信息交流;作为转录共抑制因子,参与调解不同的生理过程,甚至与肿瘤的发生相关。而且,Ajuba参与核转录因子蛋白家族NF-κB的激活反应,NF-κB能够调控很多与早期免疫反应和炎症反应相关的分子。草鱼呼肠孤病毒引发的草鱼出血病,危及中国淡水养殖业,给渔民造成极大的损失。针对草鱼呼肠孤病毒分子结构及基因功能的研究是明确病毒侵染宿主机制的基础,而对草鱼呼肠孤病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用研究则是攻克草鱼出血病的重点和难点。基于此,本课题主要从以下几个方面进行研究:1.草鱼Ajuba基因的克隆与表达根据酵母双杂交技术获得的基因片段设计特异性引物,结合RACE技术,扩增得到草鱼Ajuba基因（gc Ajuba）c DNA全长3980 bp,Gen Bank登录号为KC551289.1。其中,5’非编码区1215 bp,3’非编码区644 bp,开放阅读框（ORF）212...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LIM蛋白分类图示（ZhengandZhao,2007）
关分子（PAMPs）的存在。PRRs 中的 TLRs 和 RLRs 具有识别分子的作用。在病毒组分激活作用下，TLRs 或 RLRs 将信号传，再通过逐级传递，使干扰素调控因子(IRFs)进一步激活干扰素号途径。随后，引发 IFN-I 与 ISGs 介导的第一层抗病毒防御机呼肠孤病毒 (Grass carp reovirus，GCRV)，也称之为草鱼出血病的第一种鱼类病毒[62]，相对于水生呼肠孤病毒属中其它病毒，[44]，其引起的草鱼出血病具有高传染性、高致死性等特点，严的发展[43]。针对草鱼出血病防控的探究一直是我国淡水鱼类病RV 对酸（pH 3）、碱（pH 10）、温度等环境和乙醚、氯仿等化学定性[49]。图 1-2 为草鱼呼肠孤病毒的电镜照片及结构。GCRV 由糖蛋白组成，是双链 RNA 病毒，共有 11 条 dsRNA 编码 12 个构蛋白（VP1-VP7）和 5 个非结构蛋白（NS80、NS31、NS1645]。表 1-2 总结了 GCRV 各基因编码蛋白大小及功能。
2.1 草鱼 Ajuba 基因 cDNA 全长基于酵母双杂交实验，设计Ajuba特异性引物gcAjuba-F1和gcAjuba-R1，利用温度梯度PCR技术，扩增得到草鱼cDNA片段为1091 bp（图2-1），应用5’RACE技术得到基因序列长度为2548 bp（图2-2），同样地，3’RACE技术得到基因序列长度为1632 bp（图2-3）。结论，利用RACE技术获得草鱼Ajuba基因cDNA序列全长为3980 bp，上传至GenBank，登录号为KC551289.1。使用DNAssist软件及在线工具ORF Finder分析得知，gcAjuba cDNA包含5'端非翻译区（5′UTR）1215 bp，完整的编码序列和3'端非翻译区（3′UTR）644 bp。其开放阅读框（ORF）序列为2121 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]Aurora-A促进胰腺癌细胞放射抵抗的机制研究[J]. 孙会贞,杨恭. 中国癌症杂志. 2013(12)
[2]p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控[J]. 李亚平,饶艳伟,谷爽,李晓宁,周彤,马丽伟,杨晓春,苏静. 中国实验诊断学. 2013(04)
[3]草鱼呼肠孤病毒分子生物学研究进展[J]. 李永刚,曾伟伟,王庆,殷亮,王英英,石存斌,吴淑勤. 动物医学进展. 2013(04)
[4]基因序列的可专利性研究[J]. 姜彬. 西北工业大学学报(社会科学版). 2013(01)
[5]几种主要的RACE技术及应用[J]. 徐烨,刘雅婷,代文琼,朱晓媛,陈雪娇,仵发静,智龙,王曼君. 中国农业科技导报. 2012(02)
[6]实时荧光定量PCR技术的操作实践[J]. 杨怡姝,孙晓娜,王小利,沈思嗣,李泽琳,曾毅. 实验室研究与探索. 2011(07)
[7]草鱼出血病[J]. 邱并生. 微生物学通报. 2011(06)
[8]ATM/ATR在DNA损伤反应中的作用[J]. 孙佳,李胜范,郑丽丽. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(06)
[9]分子系统发育分析的生物信息学方法[J]. 张树波,赖剑煌. 计算机科学. 2010(08)
[10]草鱼呼肠孤病毒的致病机制及抗病毒新对策[J]. 郭帅,李家乐,吕利群. 渔业现代化. 2010(01)
博士论文
[1]稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因及Gγ亚基编码基因的生物学功能研究[D]. 李亚.浙江大学 2013
[2]HIV-1 Vpr激活细胞NF-κB信号通路分子机制的研究[D]. 刘瑞康.南开大学 2013
硕士论文
[1]草鱼呼肠孤病毒拮抗宿主细胞RNA干扰信号通路的机制研究[D]. 沈晓宝.上海海洋大学 2014
[2]草鱼呼肠孤病毒混合感染及其致细胞病变效应的蛋白组学分析[D]. 王土.上海海洋大学 2013
[3]草鱼呼肠孤病毒人工感草鱼的条件筛选和病理学研究[D]. 肖雪.四川农业大学 2007
本文编号：3605518
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LIM蛋白分类图示（ZhengandZhao,2007）
关分子（PAMPs）的存在。PRRs 中的 TLRs 和 RLRs 具有识别分子的作用。在病毒组分激活作用下，TLRs 或 RLRs 将信号传，再通过逐级传递，使干扰素调控因子(IRFs)进一步激活干扰素号途径。随后，引发 IFN-I 与 ISGs 介导的第一层抗病毒防御机呼肠孤病毒 (Grass carp reovirus，GCRV)，也称之为草鱼出血病的第一种鱼类病毒[62]，相对于水生呼肠孤病毒属中其它病毒，[44]，其引起的草鱼出血病具有高传染性、高致死性等特点，严的发展[43]。针对草鱼出血病防控的探究一直是我国淡水鱼类病RV 对酸（pH 3）、碱（pH 10）、温度等环境和乙醚、氯仿等化学定性[49]。图 1-2 为草鱼呼肠孤病毒的电镜照片及结构。GCRV 由糖蛋白组成，是双链 RNA 病毒，共有 11 条 dsRNA 编码 12 个构蛋白（VP1-VP7）和 5 个非结构蛋白（NS80、NS31、NS1645]。表 1-2 总结了 GCRV 各基因编码蛋白大小及功能。
2.1 草鱼 Ajuba 基因 cDNA 全长基于酵母双杂交实验，设计Ajuba特异性引物gcAjuba-F1和gcAjuba-R1，利用温度梯度PCR技术，扩增得到草鱼cDNA片段为1091 bp（图2-1），应用5’RACE技术得到基因序列长度为2548 bp（图2-2），同样地，3’RACE技术得到基因序列长度为1632 bp（图2-3）。结论，利用RACE技术获得草鱼Ajuba基因cDNA序列全长为3980 bp，上传至GenBank，登录号为KC551289.1。使用DNAssist软件及在线工具ORF Finder分析得知，gcAjuba cDNA包含5'端非翻译区（5′UTR）1215 bp，完整的编码序列和3'端非翻译区（3′UTR）644 bp。其开放阅读框（ORF）序列为2121 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]Aurora-A促进胰腺癌细胞放射抵抗的机制研究[J]. 孙会贞,杨恭. 中国癌症杂志. 2013(12)
[2]p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控[J]. 李亚平,饶艳伟,谷爽,李晓宁,周彤,马丽伟,杨晓春,苏静. 中国实验诊断学. 2013(04)
[3]草鱼呼肠孤病毒分子生物学研究进展[J]. 李永刚,曾伟伟,王庆,殷亮,王英英,石存斌,吴淑勤. 动物医学进展. 2013(04)
[4]基因序列的可专利性研究[J]. 姜彬. 西北工业大学学报(社会科学版). 2013(01)
[5]几种主要的RACE技术及应用[J]. 徐烨,刘雅婷,代文琼,朱晓媛,陈雪娇,仵发静,智龙,王曼君. 中国农业科技导报. 2012(02)
[6]实时荧光定量PCR技术的操作实践[J]. 杨怡姝,孙晓娜,王小利,沈思嗣,李泽琳,曾毅. 实验室研究与探索. 2011(07)
[7]草鱼出血病[J]. 邱并生. 微生物学通报. 2011(06)
[8]ATM/ATR在DNA损伤反应中的作用[J]. 孙佳,李胜范,郑丽丽. 中华临床医师杂志(电子版). 2011(06)
[9]分子系统发育分析的生物信息学方法[J]. 张树波,赖剑煌. 计算机科学. 2010(08)
[10]草鱼呼肠孤病毒的致病机制及抗病毒新对策[J]. 郭帅,李家乐,吕利群. 渔业现代化. 2010(01)
博士论文
[1]稻瘟病菌四个LIM蛋白编码基因及Gγ亚基编码基因的生物学功能研究[D]. 李亚.浙江大学 2013
[2]HIV-1 Vpr激活细胞NF-κB信号通路分子机制的研究[D]. 刘瑞康.南开大学 2013
硕士论文
[1]草鱼呼肠孤病毒拮抗宿主细胞RNA干扰信号通路的机制研究[D]. 沈晓宝.上海海洋大学 2014
[2]草鱼呼肠孤病毒混合感染及其致细胞病变效应的蛋白组学分析[D]. 王土.上海海洋大学 2013
[3]草鱼呼肠孤病毒人工感草鱼的条件筛选和病理学研究[D]. 肖雪.四川农业大学 2007
本文编号：3605518
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