黄鳝性别相关基因在不同组织甲基化的分析
发布时间：2022-01-24 01:17
DNA甲基化修饰是真核生物最常见的表观遗传现象之一,是一种可逆的过程,能够直接影响到基因的活性。越来越多的实验证明DNA甲基化在水产动物的生长发育中起着举足轻重的作用。因此,研究DNA甲基化修饰是从分子学角度研究水产动物各种生理现象的关键。黄鳝具有性逆转的特点,对于黄鳝的性别相关基因我们选择了Dtmrt基因、Sox基因和Vasa基因。这三组基因已经证实在鱼类雌雄性腺中存在表达差异。黄鳝的Dmrt2、Dmrt3、Dmrt4基因编码的mRNA全长分别为1680bp、413bp和1772bp,分别编码526、470、420个氨基酸;而Sox9al和Sox17基因的mRNA全长分别为1625bp和1775bp,编码氨基酸数量为482和399个；Vasa基因的mRNA全长2267bp,编码氨基酸618个。由于基因甲基化的开启或关闭先于基因表达产生差异,我们通过比较这些基因的甲基化在雌雄性腺以及其他组织中甲基化状态就可以简单了解这些基因的开关状况以及合适开关。本实验用甲基化敏感的限制性内切酶Hpa Ⅱ酶切黄鳝的雌雄性腺以及其他组织的DNA后,找到合适的扩增条件,根据已知的mR...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 综述
1 引言
2 DNA甲基化
3 DNA甲基化的研究方法
3.1 甲基化敏感的限制性内切酶方法
3.2 亚硫酸氢盐法
3.2.1 甲基化特异PCR法(MSP)
3.2.2 DNA甲基化荧光PCR检测
3.2.3 结合亚硫酸氢盐处理的酶解分析法(CO-BRA)
3.2.4 甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)
3.2.5 甲基化敏感的单核苷酸的扩增(Ms-SnuPE)
3.3 甲基化检测芯片技术
3.3.1 差式甲基化杂交法(DMH)
3.3.2 甲基化特异性寡核苷酸芯片(methylation specific oligonucleotide microarray,MSO microarray)
3.3.3 高效液相色谱(HPLC)法
4 DNA甲基化对基因表达的调控
5 DNA甲基化在水产动物育种中的应用
5.1 甲基化敏感扩增多态性技术在水产动物上的应用
5.2 DNA甲基化与杂种优势
5.3 DNA甲基化与分子标记
6 国内外研究进展
7 本课题的研究目的及意义
第二章 Dmrt、Sox、Vasa基因克隆及甲基化序列分析
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 总DNA的提取
2.2 引物设计
2.2.1 Dmrt基因的引物设计
2.2.2 Sox基因的引物设计
2.2.3 Vasa基因的引物设计
2.3 黄鳝性别相关基因的酶切
2.4 黄鳝性别相关基因酶切产物的扩增
2.5 扩增产物电泳分离
3 实验结果
3.1 Dmrt基因的甲基化分析
3.1.1 黄鳝各组织中Dmrt2基因的酶切结果
3.1.2 黄鳝各组织中Dmrt3基因的酶切结果
3.1.3 黄鳝各组织中Dmrt4基因的酶切结果
3.1.4 黄鳝Dmrt基因的甲基化分析
3.2 Sox基因的甲基化分析
3.2.1 黄鳝各组织中Sox9a1基因的酶切结果
3.2.2 黄鳝各组织中Sox17基因的酶切结果
3.2.3 黄鳝Sox基因的甲基化分析
3.3 Vasa基因的甲基化分析
3.3.1 黄鳝各组织中Vasa基因的酶切结果
3.3.2 黄鳝Vasa基因的甲基化分析
4 分析与讨论
5 小结
第三章 黄鳝Dmrt3基因在雌雄性腺中的甲基化差异
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 精巢和卵巢总DNA的提取
2.2 精巢和卵巢Dmrt3-FR2的酶切
2.3 精巢和卵巢Dmrt3-FR2酶切产物的扩增
2.4 扩增产物电泳分离
3 实验结果
4 分析与讨论
5 小结
全文总结
参考文献
致谢
科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]野生和“黄海1号”中国明对虾不同组织基因组DNA的MSAP分析[J]. 杜盈,何玉英,李健,刘磊,孙铭,王清印. 中国水产科学. 2013(03)
[2]哺乳动物DNA甲基化概述[J]. 何锦红,蒋金航,马云. 动物医学进展. 2013(03)
[3]哺乳动物CpG岛甲基化研究进展[J]. 许登高,周扬,潘庆杰. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2012(04)
[4]哺乳动物DNA甲基化研究进展[J]. 杨春,邢秀梅. 中国畜牧兽医. 2012(08)
[5]DNA甲基化在动物遗传育种中的研究进展[J]. 邱峥艳,郭将,杨春,赵志辉. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[6]脊椎动物Dmrt基因的研究进展[J]. 汪海,王婷茹,袁静,杨超,于祥国,李明辉,王德寿. 贵州农业科学. 2012(05)
[7]Sox9基因参与动物性别决定与分化的分子机制[J]. 陈维,王昌留. 鲁东大学学报(自然科学版). 2012(02)
[8]双酚A斑马鱼雄性生殖毒性的表观遗传学基础[J]. 乔坤,刘媛媛,李玉华,王玉柱,丁训诚,李卫华,李润生. 实验动物与比较医学. 2012 (01)
[9]黄鳝性逆转相关基因的克隆和表达[J]. 蒋骄云,冯龙,许世杰,李园园,曲宪成. 广东农业科学. 2012(02)
[10]鱼类DMRT基因的研究进展[J]. 曹谨玲,陈剑杰,甘西,罗永巨. 广东海洋大学学报. 2011(01)
博士论文
[1]性别相关基因在牙鲆性腺分化和性别表型形成中的遗传学分析[D]. 文爱韵.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2010
本文编号：3605544
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 综述
1 引言
2 DNA甲基化
3 DNA甲基化的研究方法
3.1 甲基化敏感的限制性内切酶方法
3.2 亚硫酸氢盐法
3.2.1 甲基化特异PCR法(MSP)
3.2.2 DNA甲基化荧光PCR检测
3.2.3 结合亚硫酸氢盐处理的酶解分析法(CO-BRA)
3.2.4 甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)
3.2.5 甲基化敏感的单核苷酸的扩增(Ms-SnuPE)
3.3 甲基化检测芯片技术
3.3.1 差式甲基化杂交法(DMH)
3.3.2 甲基化特异性寡核苷酸芯片(methylation specific oligonucleotide microarray,MSO microarray)
3.3.3 高效液相色谱(HPLC)法
4 DNA甲基化对基因表达的调控
5 DNA甲基化在水产动物育种中的应用
5.1 甲基化敏感扩增多态性技术在水产动物上的应用
5.2 DNA甲基化与杂种优势
5.3 DNA甲基化与分子标记
6 国内外研究进展
7 本课题的研究目的及意义
第二章 Dmrt、Sox、Vasa基因克隆及甲基化序列分析
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 总DNA的提取
2.2 引物设计
2.2.1 Dmrt基因的引物设计
2.2.2 Sox基因的引物设计
2.2.3 Vasa基因的引物设计
2.3 黄鳝性别相关基因的酶切
2.4 黄鳝性别相关基因酶切产物的扩增
2.5 扩增产物电泳分离
3 实验结果
3.1 Dmrt基因的甲基化分析
3.1.1 黄鳝各组织中Dmrt2基因的酶切结果
3.1.2 黄鳝各组织中Dmrt3基因的酶切结果
3.1.3 黄鳝各组织中Dmrt4基因的酶切结果
3.1.4 黄鳝Dmrt基因的甲基化分析
3.2 Sox基因的甲基化分析
3.2.1 黄鳝各组织中Sox9a1基因的酶切结果
3.2.2 黄鳝各组织中Sox17基因的酶切结果
3.2.3 黄鳝Sox基因的甲基化分析
3.3 Vasa基因的甲基化分析
3.3.1 黄鳝各组织中Vasa基因的酶切结果
3.3.2 黄鳝Vasa基因的甲基化分析
4 分析与讨论
5 小结
第三章 黄鳝Dmrt3基因在雌雄性腺中的甲基化差异
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验仪器
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 精巢和卵巢总DNA的提取
2.2 精巢和卵巢Dmrt3-FR2的酶切
2.3 精巢和卵巢Dmrt3-FR2酶切产物的扩增
2.4 扩增产物电泳分离
3 实验结果
4 分析与讨论
5 小结
全文总结
参考文献
致谢
科研情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]野生和“黄海1号”中国明对虾不同组织基因组DNA的MSAP分析[J]. 杜盈,何玉英,李健,刘磊,孙铭,王清印. 中国水产科学. 2013(03)
[2]哺乳动物DNA甲基化概述[J]. 何锦红,蒋金航,马云. 动物医学进展. 2013(03)
[3]哺乳动物CpG岛甲基化研究进展[J]. 许登高,周扬,潘庆杰. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2012(04)
[4]哺乳动物DNA甲基化研究进展[J]. 杨春,邢秀梅. 中国畜牧兽医. 2012(08)
[5]DNA甲基化在动物遗传育种中的研究进展[J]. 邱峥艳,郭将,杨春,赵志辉. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[6]脊椎动物Dmrt基因的研究进展[J]. 汪海,王婷茹,袁静,杨超,于祥国,李明辉,王德寿. 贵州农业科学. 2012(05)
[7]Sox9基因参与动物性别决定与分化的分子机制[J]. 陈维,王昌留. 鲁东大学学报(自然科学版). 2012(02)
[8]双酚A斑马鱼雄性生殖毒性的表观遗传学基础[J]. 乔坤,刘媛媛,李玉华,王玉柱,丁训诚,李卫华,李润生. 实验动物与比较医学. 2012 (01)
[9]黄鳝性逆转相关基因的克隆和表达[J]. 蒋骄云,冯龙,许世杰,李园园,曲宪成. 广东农业科学. 2012(02)
[10]鱼类DMRT基因的研究进展[J]. 曹谨玲,陈剑杰,甘西,罗永巨. 广东海洋大学学报. 2011(01)
博士论文
[1]性别相关基因在牙鲆性腺分化和性别表型形成中的遗传学分析[D]. 文爱韵.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2010
本文编号：3605544
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