十足目虹彩病毒（DIV1）环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立及应用

发布时间：2022-01-24 14:43

　　本研究以十足目虹彩病毒（Decapod iridescent virus 1, DIV1）主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）检测方法,并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25μl反应体系中包含2.5μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg²⁺、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart^? DNA聚合酶、0.8μmol/L EvaGreen^?和4.4μl ddH₂O。该方法检测灵敏度下限为3.54×10²拷贝/反应;与虾肝肠胞虫（EHP）、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_AHPND)、对虾偷死野田村病毒（CMNV）、传染性皮下及造血组织坏死... 

【文章来源】：渔业科学进展. 2020,41(06)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

十足目虹彩病毒(DIV1) LAMP反应体系的优化

十足目虹彩病毒(DIV1) LAMP方法以p MD18-DIV1质粒标准品为模板产生的扩增曲线(a)和标准曲线(b)

以DIV1、EHP、VpAHPND、CMNV、IHHNV、WSSV、TSV和YHV等主要虾类病原DNA或c DNA为模板进行DIV1-LAMP检测的特异性分析，结果显示，只有当检测样品含有DIV1阳性核酸时，扩增反应才产生“S”形扩增曲线，其他病原的核酸均无阳性扩增曲线(图3)。该结果说明，本研究建立的DIV1-LAMP方法与上述其他常见的对虾病原无交叉反应，可特异性检测DIV1。2.4 DIV1-LAMP方法可重复性和可重现性分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]2016～2017年中国沿海省市虾类偷死野田村病毒（CMNV）分子流行病学调查[J]. 李小平,万晓媛,张庆利,黄倢,董宣,王秀华,邱亮,宋增磊,程东远.  渔业科学进展. 2019(02)

博士论文
[1]养殖对虾的病毒宏基因组分析及虾血细胞虹彩病毒（Shrimp hemocyte iridescent virus,SHIV）的分子流行病学研究[D]. 邱亮.上海海洋大学 2018
[2]大鲵虹彩病毒病病原的分离、鉴定、基因组测序及大鲵群体遗传多样性分析[D]. 孟彦.华中农业大学 2013

硕士论文
[1]十足目虹彩病毒1（DIV1）的易感宿主调查[D]. 陈形.上海海洋大学 2019
[2]两种对虾新发病毒核酸检测技术的建立及应用[D]. 李小平.上海海洋大学 2018
[3]实时荧光定量PCR在凡纳滨对虾病原VPAHPND及SHIV检测中的应用[D]. 陈蒙蒙.上海海洋大学 2017



本文编号：3606763