芦丁对无乳链球菌分选酶A活性的抑制作用研究
发布时间：2022-02-19 18:15
无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）又被称为B族链球菌,是一种会导致人体和动物患病的重要病原体,该菌也会引起水生物种的多种疾病。无乳链球菌在水产养殖中是导致罗非鱼患病的主要致病菌,抗生素是治疗罗非鱼无乳链球菌病的主要手段。然而由于抗生素的不合理使用,无乳链球菌产生了严重的耐药性,导致抗生素治疗效果下降甚至失败,严重威胁罗非鱼养殖业的健康发展。因此,亟待研发全新机制的抗罗非鱼无乳链球菌感染的药物。中草药在我国具有长久的使用历史,具有原材料来源广泛、低毒或无毒性、活性物质多等优势,中草药成为代替抗生素治疗疾病的首要选择。分选酶A（Srt A）是一种转肽酶,是由大部分革兰氏阳性菌分泌的,与细菌粘附在宿主细胞表面的过程有关,是研究抗革兰氏阳性菌药物的靶标。本文以Srt A为靶标,研究了芦丁对无乳链球菌体外致病力的作用,研究结果如下:1. 本文首先对无乳链球菌ATCC 51487的Srt A进行了研究,通过采用分子克隆、原核表达纯化和活性试验等一系列方法,探索了无乳链球菌重组Srt A的表达纯化条件和功能。结果显示,试验构建的srt A△N82-p...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 文献综述
1.1 无乳链球菌的研究进展
1.1.1 无乳链球菌的流行病学
1.1.2 无乳链球菌的发病机理
1.1.3 无乳链球菌的毒力因子和血清学
1.1.4 无乳链球菌的检测方法和分子分型
1.2 药物与细菌性疾病治疗研究进展
1.2.1 化学性药物
1.2.2 植物性药物
1.2.3 疫苗
1.2.4 微生物类
1.3 研究的目的和意义
第二章 无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 srt A-p GEX-6p-1 重组表达载体的构建
2.2.2 SrtA的表达与条件优化
2.2.3 蛋白纯化
2.2.4 分选酶活性测定
2.2.5 分选酶的Km值测定
2.3 讨论
第三章 芦丁对分选酶SrtA活性的作用
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 芦丁对SrtA的活性抑制效果
3.2.2 芦丁对无乳链球菌的最小抑菌浓度和生长曲线
3.2.3 芦丁与无乳链球菌对纤维连接蛋白的黏附作用
3.2.4 芦丁对无乳链球菌生物被膜生长的影响
3.3 讨论
第四章 芦丁对Srr1在无乳链球菌表面锚定的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 Srr1核酸序列与氨基酸序列
4.2.2 Srr1抗原诱导表达
4.2.3 Srr1抗原蛋白纯化结果
4.2.4 Srr1抗体纯化效价、浓度及表达
4.2.5 Srr1的Dot-blot结果
4.3 讨论
第五章 结论与展望
5.1 研究结论
5.2 展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]无乳链球菌的分子分型及耐药特征分析[J]. 南征,周芳,闫东辉,苏建荣,周妍妍. 疾病监测. 2019(12)
[2]3种抗菌药物对维氏气单胞菌的体外抑菌效果[J]. 李梦梦,李莉,朱永肖,罗晓雯,赵贤亮,孔祥会. 动物医学进展. 2019(10)
[3]几种消毒剂对弧菌的抑制效果研究[J]. 孙昌飞,祭仲石,韦艳,朱建楼,赵光明. 科学养鱼. 2019(10)
[4]罗非鱼无乳链球菌疫苗研制及检测IgM抗体ELISA方法的建立[J]. 田珂. 黑龙江畜牧兽医. 2019(17)
[5]水产养殖中益生菌研究进展[J]. 田启文,郭振,嵇乐乐,贺帅,刘培,朱小燕,李相前. 工业微生物. 2019(04)
[6]二氧化氯水体消毒剂对细菌的灭杀效果[J]. 覃惠明,黄杰,罗福广,文衍红,易弋. 河北渔业. 2019(08)
[7]中草药水提物对罗非鱼无乳链球菌的体外抑菌效果[J]. 丁月霞,叶梓茵,岑雪萍,邵敏,李慧茵,张宏伟,马驿. 中兽医医药杂志. 2019(04)
[8]维氏气单胞菌灭活疫苗对草鱼免疫相关基因表达的影响及其保护效果[J]. 任燕,时云朵,曾伟伟,王英英,李莹莹,常藕琴,尹纪元,石存斌. 中国生物制品学杂志. 2019(07)
[9]四种中草药对致病菌的抑菌作用测试[J]. 林炎权,王康,林先,李秀娟,鲁义善,程俊. 海洋与渔业. 2019(07)
[10]三种消毒剂对大黄鱼致病性弧菌的体外杀灭作用研究[J]. 谷桂英,王欣,付强. 工业微生物. 2019(03)
博士论文
[1]罗非鱼无乳链球菌病病原学、病理学及cpsE基因的原核表达研究[D]. 黄锦炉.四川农业大学 2012
硕士论文
[1]金黄色葡萄球菌Sortase A小分子抑制剂的研究[D]. 倪腾凤.中国科学院上海药物研究所 2016
[2]瞬时受体电位通道蛋白小分子配体的设计与合成[D]. 宋珍臻.浙江理工大学 2015
本文编号：3633382
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 文献综述
1.1 无乳链球菌的研究进展
1.1.1 无乳链球菌的流行病学
1.1.2 无乳链球菌的发病机理
1.1.3 无乳链球菌的毒力因子和血清学
1.1.4 无乳链球菌的检测方法和分子分型
1.2 药物与细菌性疾病治疗研究进展
1.2.1 化学性药物
1.2.2 植物性药物
1.2.3 疫苗
1.2.4 微生物类
1.3 研究的目的和意义
第二章 无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 srt A-p GEX-6p-1 重组表达载体的构建
2.2.2 SrtA的表达与条件优化
2.2.3 蛋白纯化
2.2.4 分选酶活性测定
2.2.5 分选酶的Km值测定
2.3 讨论
第三章 芦丁对分选酶SrtA活性的作用
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 芦丁对SrtA的活性抑制效果
3.2.2 芦丁对无乳链球菌的最小抑菌浓度和生长曲线
3.2.3 芦丁与无乳链球菌对纤维连接蛋白的黏附作用
3.2.4 芦丁对无乳链球菌生物被膜生长的影响
3.3 讨论
第四章 芦丁对Srr1在无乳链球菌表面锚定的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 Srr1核酸序列与氨基酸序列
4.2.2 Srr1抗原诱导表达
4.2.3 Srr1抗原蛋白纯化结果
4.2.4 Srr1抗体纯化效价、浓度及表达
4.2.5 Srr1的Dot-blot结果
4.3 讨论
第五章 结论与展望
5.1 研究结论
5.2 展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]无乳链球菌的分子分型及耐药特征分析[J]. 南征,周芳,闫东辉,苏建荣,周妍妍. 疾病监测. 2019(12)
[2]3种抗菌药物对维氏气单胞菌的体外抑菌效果[J]. 李梦梦,李莉,朱永肖,罗晓雯,赵贤亮,孔祥会. 动物医学进展. 2019(10)
[3]几种消毒剂对弧菌的抑制效果研究[J]. 孙昌飞,祭仲石,韦艳,朱建楼,赵光明. 科学养鱼. 2019(10)
[4]罗非鱼无乳链球菌疫苗研制及检测IgM抗体ELISA方法的建立[J]. 田珂. 黑龙江畜牧兽医. 2019(17)
[5]水产养殖中益生菌研究进展[J]. 田启文,郭振,嵇乐乐,贺帅,刘培,朱小燕,李相前. 工业微生物. 2019(04)
[6]二氧化氯水体消毒剂对细菌的灭杀效果[J]. 覃惠明,黄杰,罗福广,文衍红,易弋. 河北渔业. 2019(08)
[7]中草药水提物对罗非鱼无乳链球菌的体外抑菌效果[J]. 丁月霞,叶梓茵,岑雪萍,邵敏,李慧茵,张宏伟,马驿. 中兽医医药杂志. 2019(04)
[8]维氏气单胞菌灭活疫苗对草鱼免疫相关基因表达的影响及其保护效果[J]. 任燕,时云朵,曾伟伟,王英英,李莹莹,常藕琴,尹纪元,石存斌. 中国生物制品学杂志. 2019(07)
[9]四种中草药对致病菌的抑菌作用测试[J]. 林炎权,王康,林先,李秀娟,鲁义善,程俊. 海洋与渔业. 2019(07)
[10]三种消毒剂对大黄鱼致病性弧菌的体外杀灭作用研究[J]. 谷桂英,王欣,付强. 工业微生物. 2019(03)
博士论文
[1]罗非鱼无乳链球菌病病原学、病理学及cpsE基因的原核表达研究[D]. 黄锦炉.四川农业大学 2012
硕士论文
[1]金黄色葡萄球菌Sortase A小分子抑制剂的研究[D]. 倪腾凤.中国科学院上海药物研究所 2016
[2]瞬时受体电位通道蛋白小分子配体的设计与合成[D]. 宋珍臻.浙江理工大学 2015
本文编号：3633382
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