凡纳滨对虾免疫相关基因QM和SERPIN的功能研究
发布时间：2022-02-21 20:31
凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）具有生长速度快、肉质鲜美、抗病力强等优点，得以在我国大面积的养殖。然而，随着养殖规模的不断扩大，病害问题也日渐凸显，造成严重经济损失。由于对虾缺乏获得性免疫，只能依靠先天免疫系统来抵御病原的入侵。因而从先天免疫途径入手探究对虾抗病相关基因为今后凡纳滨对虾养殖的抗病选育奠定基础。由酚氧化酶（phenoloxidase，PO）、蛋白酶、模式识别蛋白和蛋白抑制剂构成的酚氧化酶原激活系统（prohenoloxidase-activated system，proPO-AS）是甲壳动物重要的识别和防御系统，直接参与对非己信号的识别，通过抑制病原体胞外蛋白酶和几丁质酶的活性，增强血细胞吞噬作用、形成结节或包囊以及介导凝集和凝结，产生杀菌物质等，从而在伤口愈合、抑制甚至杀灭病原微生物方面发挥重要作用。因此，阐明对虾酚氧化酶原激活系统中关键分子的功能对对虾抗病免疫的研究具有重要的意义。本研究根据同源物种基因序列，设计特异性引物，结合实时荧光定量PCR技术、双链RNA干扰技术、原核表达载体的构建、融合蛋白纯化以及生物信息学分析等，克隆了凡纳滨对虾QM和...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 我国凡纳滨对虾养殖的现状
1.2 甲壳动物的免疫系统
1.2.1 器官免疫
1.2.2 细胞免疫
1.2.3 体液免疫
1.3 RNA 干扰技术在对虾免疫研究中的应用
1.3.1 dsRNA 的干扰机制
1.3.2 dsRNA 在免疫基因功能研究中的应用
1.4 对虾免疫基因 QM 和 serpin 的研究进展
1.4.1 QM 基因的研究进展
1.4.2 Serpin 基因的研究进展
第二章 凡纳滨对虾 QM 基因的功能研究
2.1 材料和方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 感受态细胞的制备
2.1.3 总 RNA 的提取
2.1.4 cDNA 第一链的合成
2.1.5 LvQM 基因部分 cDNA 序列的获得
2.1.6 LvQM 基因的生物信息学分析
2.1.7 LvQM 基因双链 RNA 的体外合成
2.1.8 LvQM 基因重组蛋白的表达和纯化
2.1.9 利用实时定量 qRT-PCR 检测 LvQM 基因的表达量
2.1.10 双链 RNA 注射后对虾累积死亡率检测
2.1.11 细菌清除试验
2.1.12 酚氧化酶活力测定
2.2 结果和分析
2.2.1 LvQM 基因的克隆和序列分析
2.2.2 LvQM 基因氨基酸序列比对和系统进化树构建
2.2.3 LvQM 基因的组织差异表达
2.2.4 LvQM 基因在病菌刺激下的时序表达
2.2.5 RNA 干扰后相关基因表达量变化
2.2.6 RNA 干扰后累积死亡率变化
2.2.7 LvQM 基因重组蛋白的纯化
2.2.8 rLvQM 蛋白对细菌的清除
2.2.9 LvQM 基因对酚氧化酶活力的调节
2.3 讨论
第三章 凡纳滨对虾 SERPIN 基因的功能研究
3.1 材料和方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 Lvserpin 基因部分 cDNA 序列的获得
3.1.3 Lvserpin 基因的生物信息学分析
3.1.4 Lvserpin 基因的组织分布
3.1.5 不同病原刺激下 Lvserpin 基因的时序表达
3.1.6 Lvserpin 基因双链 RNA 的体外合成
3.1.7 注射 Lvserpin dsRNA 后相关基因表达量的检测
3.1.8 双链 RNA 注射后对虾累积死亡率检测
3.1.9 Lvserpin 基因重组蛋白的表达和纯化
3.1.10 蛋白酶活性抑制实验
3.1.11 细菌生长抑制实验
3.1.12 酚氧化酶系统抑制实验
3.2 结果和分析
3.2.1 Lvserpin 基因的克隆和序列分析
3.2.2 Lvserpin 基因氨基酸序列比对和系统进化树构建
3.2.3 Lvserpin 基因的组织分布
3.2.4 Lvserpin 基因应对不同病原刺激的时序表达
3.2.5 双链 RNA 对 Lvserpin 基因沉默
3.2.6 RNA 干扰后相关基因表达量变化
3.2.7 RNA 干扰后累积死亡率变化
3.2.8 Lvserpin 基因重组蛋白的表达和纯化
3.2.9 rLvserpin 蛋白对蛋白酶活力的抑制
3.2.10 rLvserpin 蛋白对细菌生长的抑制
3.2.11 rLvserpin 蛋白对酚氧化酶激活的抑制
3.3 讨论
第四章 结论、创新点和展望
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]2011～2012我国对虾产业发展现状及展望[J]. 崔和,肖乐. 中国水产. 2012(07)
[2]凡纳滨对虾生物学及养殖生态学研究进展[J]. 王兴强,马甡,董双林. 海洋湖沼通报. 2004(04)
[3]世界重要养殖品种——南美白对虾生物学简介[J]. 张伟权. 海洋科学. 1990(03)
本文编号：3637993
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 我国凡纳滨对虾养殖的现状
1.2 甲壳动物的免疫系统
1.2.1 器官免疫
1.2.2 细胞免疫
1.2.3 体液免疫
1.3 RNA 干扰技术在对虾免疫研究中的应用
1.3.1 dsRNA 的干扰机制
1.3.2 dsRNA 在免疫基因功能研究中的应用
1.4 对虾免疫基因 QM 和 serpin 的研究进展
1.4.1 QM 基因的研究进展
1.4.2 Serpin 基因的研究进展
第二章 凡纳滨对虾 QM 基因的功能研究
2.1 材料和方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 感受态细胞的制备
2.1.3 总 RNA 的提取
2.1.4 cDNA 第一链的合成
2.1.5 LvQM 基因部分 cDNA 序列的获得
2.1.6 LvQM 基因的生物信息学分析
2.1.7 LvQM 基因双链 RNA 的体外合成
2.1.8 LvQM 基因重组蛋白的表达和纯化
2.1.9 利用实时定量 qRT-PCR 检测 LvQM 基因的表达量
2.1.10 双链 RNA 注射后对虾累积死亡率检测
2.1.11 细菌清除试验
2.1.12 酚氧化酶活力测定
2.2 结果和分析
2.2.1 LvQM 基因的克隆和序列分析
2.2.2 LvQM 基因氨基酸序列比对和系统进化树构建
2.2.3 LvQM 基因的组织差异表达
2.2.4 LvQM 基因在病菌刺激下的时序表达
2.2.5 RNA 干扰后相关基因表达量变化
2.2.6 RNA 干扰后累积死亡率变化
2.2.7 LvQM 基因重组蛋白的纯化
2.2.8 rLvQM 蛋白对细菌的清除
2.2.9 LvQM 基因对酚氧化酶活力的调节
2.3 讨论
第三章 凡纳滨对虾 SERPIN 基因的功能研究
3.1 材料和方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 Lvserpin 基因部分 cDNA 序列的获得
3.1.3 Lvserpin 基因的生物信息学分析
3.1.4 Lvserpin 基因的组织分布
3.1.5 不同病原刺激下 Lvserpin 基因的时序表达
3.1.6 Lvserpin 基因双链 RNA 的体外合成
3.1.7 注射 Lvserpin dsRNA 后相关基因表达量的检测
3.1.8 双链 RNA 注射后对虾累积死亡率检测
3.1.9 Lvserpin 基因重组蛋白的表达和纯化
3.1.10 蛋白酶活性抑制实验
3.1.11 细菌生长抑制实验
3.1.12 酚氧化酶系统抑制实验
3.2 结果和分析
3.2.1 Lvserpin 基因的克隆和序列分析
3.2.2 Lvserpin 基因氨基酸序列比对和系统进化树构建
3.2.3 Lvserpin 基因的组织分布
3.2.4 Lvserpin 基因应对不同病原刺激的时序表达
3.2.5 双链 RNA 对 Lvserpin 基因沉默
3.2.6 RNA 干扰后相关基因表达量变化
3.2.7 RNA 干扰后累积死亡率变化
3.2.8 Lvserpin 基因重组蛋白的表达和纯化
3.2.9 rLvserpin 蛋白对蛋白酶活力的抑制
3.2.10 rLvserpin 蛋白对细菌生长的抑制
3.2.11 rLvserpin 蛋白对酚氧化酶激活的抑制
3.3 讨论
第四章 结论、创新点和展望
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]2011～2012我国对虾产业发展现状及展望[J]. 崔和,肖乐. 中国水产. 2012(07)
[2]凡纳滨对虾生物学及养殖生态学研究进展[J]. 王兴强,马甡,董双林. 海洋湖沼通报. 2004(04)
[3]世界重要养殖品种——南美白对虾生物学简介[J]. 张伟权. 海洋科学. 1990(03)
本文编号：3637993
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/scyylw/3637993.html
