尼罗罗非鱼TLR7亚家族及其信号通路相关基因的克隆及功能初步分析

发布时间：2022-07-04 21:05

　　Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）是天然免疫中重要的模式识别受体（Pathogen recognized receptor,PRR）。TLR7亚家族是TLRs中重要的成员之一,由TLR7、TLR8和TLR9组成,分布于细胞内涵体,能识别细菌或病毒核酸,并通过髓样分化蛋白88（Myeloid differentiation factor88,My D88）依赖性和β干扰素诱导型含TIR结构域的接头蛋白（TIR domain-containing adaptor inducing IFN-β,TRIF）依赖性信号通路,在抗病免疫反应中起重要作用。罗非鱼（Oreochromis niloticus）是我国淡水养殖的优良品种,每年养殖产量约占世界总产量的一半。但近年来的病害问题给我国罗非鱼养殖造成重大经济损失。为了解罗非鱼的免疫系统,探究其抗病免疫机制,本研究通过反转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）获得尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）TLR7亚家族基因及其信号通路相关基因TRIF和含TIR结构域接合... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 TLR及其信号通路研究进展
    1.2 TLR7亚家族的研究进展
    1.3 TRIF和 TIRAP的研究进展
    1.4 研究的目的及意义
2 尼罗罗非鱼TLR7亚家族基因的克隆和表达分析
    2.1 实验材料和方法
        2.1.1 实验材料和试剂
        2.1.2 RNA提取及cDNA合成
        2.1.3 TLR7、TLR8和TLR9 基因cDNA克隆
        2.1.4 生物信息学分析
        2.1.5 人工感染无乳链球菌
        2.1.6 LPS和 PolyI:C刺激实验
        2.1.7 实时荧光定量PCR
    2.2 结果与分析
        2.2.1 尼罗罗非鱼总RNA提取
        2.2.2 TLR7、TLR8和TLR9 基因的cDNA序列分析
        2.2.3 TLR7、TLR8和TLR9 与其他物种的氨基酸序列比对
        2.2.4 TLR7、TLR8和TLR9 与其他物种的同源性比较和系统进化分析
        2.2.5 TLR7、TLR8和TLR9 基因在健康个体中组织表达分析
        2.2.6 人工感染无乳链球菌后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表达的变化
        2.2.7 LPS刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表达的变化
        2.2.8 PolyI:C刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达的变化
    2.3 讨论
    2.4 小结
3 尼罗罗非鱼TLR7亚家族信号通路相关基因的克隆和表达分析
    3.1 实验材料和方法
        3.1.1 实验材料和试剂
        3.1.2 RNA提取及cDNA合成
        3.1.3 TRIF和 TIRAP基因cDNA克隆
        3.1.4 生物信息学分析
        3.1.5 人工感染无乳链球菌
        3.1.6 LPS和 PolyI:C刺激实验
        3.1.7 实时荧光定量PCR
    3.2 结果与分析
        3.2.1 TRIF和 TIRAP基因的cDNA序列分析
        3.2.2 TRIF和 TIRAP与其他物种的氨基酸序列比对
        3.2.3 TRIF和 TIRAP与其他物种的同源性比较和系统进化分析
        3.2.4 TRIF和 TIRAP基因在健康个体中组织表达分析
        3.2.5 人工感染无乳链球菌后TRIF和 TIRAP mRNA的表达变化
        3.2.6 LPS刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表达变化
        3.2.7 PolyI:C刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表达变化
    3.3 讨论
    3.4 小结
4 尼罗罗非鱼TLR7亚家族基因及其信号通路相关基因的功能初步分析
    4.1 实验材料和方法
        4.1.1 实验材料和试剂
        4.1.2 尼罗罗非鱼TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表达载体的构建
        4.1.3 尼罗罗非鱼TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亚细胞定位
        4.1.4 双荧光素酶报告分析
    4.2 结果与分析
        4.2.1 尼罗罗非鱼TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表达载体的构建
        4.2.2 尼罗罗非鱼TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亚细胞定位
        4.2.3 尼罗罗非鱼TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因过表达对NF-κB活性的影响
    4.3 讨论
    4.4 小结
5 全文总结
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]赤眼鳟TRIF基因cDNA克隆及其组织表达分析[J]. 徐莹,李耀国,王荣华,刘巧林,王静安,赵鑫,肖调义.  湖南师范大学自然科学学报. 2018(02)
[2]尼罗罗非鱼TRIM16和TRIM25基因的克隆及表达分析[J]. 郑建美,高风英,卢迈新,刘志刚,曹建萌,可小丽,王淼.  农业生物技术学报. 2017(06)
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[4]鱼类无乳链球菌病的研究进展[J]. 邓永强,汪开毓.  中国畜牧兽医. 2016(09)
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[7]接头分子在TLRs信号传导中的作用研究进展[J]. 李婷婷,刘阳,苏永超,杜立银,王立伟.  河南农业科学. 2016(01)
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[10]NF-κB信号通路在鱼类先天性免疫中的作用[J]. 杨冰贞,张民,王克坚.  生物技术通报. 2014(01)

博士论文
[1]半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）先天性免疫基因TLR2、TLR7、CD94和Bf的功能研究[D]. 李学鹏.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2017
[2]尼罗罗非鱼Toll样受体信号通路基因表达研究[D]. 庞纪彩.上海海洋大学 2016

硕士论文
[1]东北七鳃鳗Toll样受体信号通路基因表达研究[D]. 丁少青.上海海洋大学 2018
[2]团头鲂Toll样受体基因序列分析及其表达研究[D]. 赖瑞芳.华中农业大学 2016
[3]卵形鲳鲹TLR7亚家族及其信号通路相关基因的克隆与免疫应答分析[D]. 孙宝宝.广西大学 2016
[4]人TIRAP结构域TIR的克隆、表达、纯化及三维结构模型构建[D]. 王兵.福建农林大学 2007



本文编号：3655923