花鳗鲡幼鳗VHA、NKA及FXYD11基因适应盐度变化的分子调节机制
发布时间：2022-08-09 17:40
广盐性鱼类渗透压调节的分子机制是目前鱼类生理学的研究热点。花鳗鲡（Anguilla marmorata）是我国典型的降海洄游性鱼类,花鳗鲡鳗苗须从海水迁移到淡水中生长发育,在环境盐度变化的过程中,我们对花鳗鲡幼鳗适应盐度的机制还不清楚,而且这方面的基础研究也相对滞后。本论文从基因克隆、mRNA表达、蛋白表达和酶活性四个方面入手,围绕花鳗鲡幼鳗Vacuo lar-Type-H+-ATPase（VHA）、 Na+/K+-ATPase（NKA）和FXYD11适应盐度变化的调控机制进行研究,并进一步阐明调控基因在转录水平与蛋白质表达水平上的差异及其在适应盐度变化过程中的作用,揭示花鳗鲡幼鳗应对环境盐度变化的适应性调节机制。研究结果如下：（1）采用同源克隆和cDNA末端快速扩增（RACE）的方法分离克隆了花鳗鲡Vacuo lar-Type-H+-ATPase β1基因全长cDNA,长度1741bp,包括503个氨基酸的开放阅读框（ORF）,83bp的5’末端非编码区（UTR）以及146bp的3’末端非编码区（UTR）。对推测的该基因氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示：花鳗鲡与其它鱼类该基因的...
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 花鳗鲡的研究进展
1.1.1 花鳗鲡的分类地位和资源现状
1.1.2 花鳗鲡的研究现状
1.2 广盐性鱼类的渗透压调节研究进展
1.2.1 氯细胞
1.2.2 渗透压调节的主要激素
1.2.3 渗透压调节重要的离子转运体
1.3 鱼类3个渗透压调节基因的研究进展
1.3.1 Vacuolar-Type-H~+-ATPase基因的研究
1.3.2 Na~+-K~+-ATPase和FXYD基因的研究
1.4 本课题研究的目的和意义
1.5 研究内容和技术路线
1.5.1 研究内容
1.5.2 技术路线
第2章 花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H~+-ATPase亚基、Na~+-K~+-ATPase亚基及FXYD11基因的序列生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料与设计
2.1.2 VHAβ1、NKAα1以及FXYD11部分基因序列克隆
2.1.3 cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得VHAβ1、NKAα1以及FXYD11基因全长
2.2 结果
2.2.1 花鳗鲡渗透压调节基因VHAβ1序列分析
2.2.2 花鳗鲡渗透压调节基因VHAβ1同源性分析及系统进化树的构建
2.2.3 花鳗鲡渗透压调节基因NKAα1、FXYD11序列分析
2.3 讨论
2.4 本章小结
第3章 花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H+~+-ATPaseβ1、Na~+-K~+-ATPaseα1以及FXYD11基因不同时空的差异表达
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料和设计
3.1.2 总RNA的提取和反转录
3.1.3 荧光定量PCR检测VHAβ1、NKAα1以及FXYD11mRNA的表达量
3.1.4 数据处理与分析
3.2 结果
3.2.1 花鳗鲡幼鳗进入不同盐度环境后在转录水平的VHAβ1基因mRNA的相对表达量
3.2.2 花鳗鲡幼鳗进入不同盐度环境后在转录水平的NKAα1以及FXYD11基因mRNA的相对表达量
3.3 讨论
3.4 本章小结
第4章 不同盐度对花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase活力和蛋白表达的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料与设计
4.1.2 不同盐度下花鳗鲡幼鳗鳃和肾脏中Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活性的测定
4.1.3 Western blotting技术检测不同盐度下花鳗鲡幼鳗鳃组织Vacuolar-Type-H~+-ATPase和Na~+K~+-ATPase的蛋白表达量
4.1.4 数据处理与分析
4.2 结果
4.2.1 不同盐度对花鳗鲡幼鳗鳃和肾脏Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活力的影响
4.2.2 不同盐度对花鳗鲡幼鳗鳃组织Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase蛋白表达的影响
4.3 讨论
4.4 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果目录
致谢
本文编号：3672996
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 花鳗鲡的研究进展
1.1.1 花鳗鲡的分类地位和资源现状
1.1.2 花鳗鲡的研究现状
1.2 广盐性鱼类的渗透压调节研究进展
1.2.1 氯细胞
1.2.2 渗透压调节的主要激素
1.2.3 渗透压调节重要的离子转运体
1.3 鱼类3个渗透压调节基因的研究进展
1.3.1 Vacuolar-Type-H~+-ATPase基因的研究
1.3.2 Na~+-K~+-ATPase和FXYD基因的研究
1.4 本课题研究的目的和意义
1.5 研究内容和技术路线
1.5.1 研究内容
1.5.2 技术路线
第2章 花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H~+-ATPase亚基、Na~+-K~+-ATPase亚基及FXYD11基因的序列生物信息学分析
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料与设计
2.1.2 VHAβ1、NKAα1以及FXYD11部分基因序列克隆
2.1.3 cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得VHAβ1、NKAα1以及FXYD11基因全长
2.2 结果
2.2.1 花鳗鲡渗透压调节基因VHAβ1序列分析
2.2.2 花鳗鲡渗透压调节基因VHAβ1同源性分析及系统进化树的构建
2.2.3 花鳗鲡渗透压调节基因NKAα1、FXYD11序列分析
2.3 讨论
2.4 本章小结
第3章 花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H+~+-ATPaseβ1、Na~+-K~+-ATPaseα1以及FXYD11基因不同时空的差异表达
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料和设计
3.1.2 总RNA的提取和反转录
3.1.3 荧光定量PCR检测VHAβ1、NKAα1以及FXYD11mRNA的表达量
3.1.4 数据处理与分析
3.2 结果
3.2.1 花鳗鲡幼鳗进入不同盐度环境后在转录水平的VHAβ1基因mRNA的相对表达量
3.2.2 花鳗鲡幼鳗进入不同盐度环境后在转录水平的NKAα1以及FXYD11基因mRNA的相对表达量
3.3 讨论
3.4 本章小结
第4章 不同盐度对花鳗鲡幼鳗Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase活力和蛋白表达的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料与设计
4.1.2 不同盐度下花鳗鲡幼鳗鳃和肾脏中Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活性的测定
4.1.3 Western blotting技术检测不同盐度下花鳗鲡幼鳗鳃组织Vacuolar-Type-H~+-ATPase和Na~+K~+-ATPase的蛋白表达量
4.1.4 数据处理与分析
4.2 结果
4.2.1 不同盐度对花鳗鲡幼鳗鳃和肾脏Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活力的影响
4.2.2 不同盐度对花鳗鲡幼鳗鳃组织Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase蛋白表达的影响
4.3 讨论
4.4 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果目录
致谢
本文编号：3672996
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