半滑舌鳎性腺响应高温刺激的基因表达分析

发布时间：2022-08-13 13:26

　　脊椎动物性别决定类型通常可以分为遗传性别决定（genetic sex determination,GSD）和环境性别决定（environmental sex determination,ESD）。在相对低等的脊椎动物中,性别决定受到环境的影响较大。一般而言,温度是影响ESD物种性别决定的主要因素。尽管前期许多研究报道了温度对性别决定的影响,但是ESD物种如何响应温度的调控机制尚不清楚。半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）属于鲽形目（Pleuronectiformes）、舌鳎科（Cynoglossidae）、舌鳎属（Cynoglossus）,是我国重要的海水经济鱼类。半滑舌鳎生长性状具有明显的性别二态性,其雌性个体大且生长速度是雄性的2-4倍。半滑舌鳎性染色体为ZZ/ZW,具有典型的遗传性别决定（GSD）和环境性别决定（ESD）特征。研究发现,在养殖群体中,大约14%的ZW遗传雌性会逆转为表型雄鱼,即伪雄鱼。在性别分化的关键时期,利用高温（28°C）诱导,其性逆转比例可达60%。由于性逆转导致雌鱼比例过低,严重影响了半滑舌鳎产业的规模化发展。鱼类响应温度变化的机制解析... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 鱼类性别决定与分化机制及相关基因
        1.1.1 鱼类性别决定机制
        1.1.2 鱼类性别相关基因
    1.2 温度与激素对鱼类性别决定与分化的调控作用
        1.2.1 环境温度
        1.2.2 性类固醇激素
    1.3 鱼类响应外界环境变化的研究进展
        1.3.1 热休克蛋白(HSP)
        1.3.2 皮质醇
        1.3.3 表观调控因子
    1.4 半滑舌鳎是研究温度对性逆转的理想模型
第二章 高温胁迫半滑舌鳎性腺转录组比较分析
    引言
    2.1 样品采集
        2.1.1 样品制备及高温处理实验
        2.1.2 半滑舌鳎的DNA提取及性别鉴定
        2.1.3 半滑舌鳎总RNA提取方法
        2.1.4 半滑舌鳎RNA文库构建及测序
        2.1.5 RNA-seq数据处理
        2.1.6 样本基因表达量计算及高温与对照度差异表达基因鉴定
        2.1.7 差异表达基因GO及 KEGG分析
        2.1.8 通过荧光定量PCR验证RNA-seq数据
    2.2 实验结果及分析
        2.2.1 半滑舌鳎性别鉴定及性腺样品制备
        2.2.2 半滑舌鳎性腺RNA-seq数据分析
        2.2.3 高温胁迫处理后PCA分析及差异表达基因数据统计
        2.2.4 高温胁迫处理后的性别特异差异基因
        2.2.5 性别特异基因的GO和 KEGG分析
        2.2.6 高温胁迫后三种性别共有的差异基因
        2.2.7 荧光定量PCR验证RNA-seq数据
    2.3 讨论
第三章 半滑舌鳎HSD11B1L和 HSD11B2 基因克隆及表达分析
    引言
    3.1 材料
        3.1.1 样品制备
        3.1.2 DNA提取及性别鉴定
        3.1.3 RNA提取
        3.1.4 hsd11b1l和 hsd11b2 的全长克隆
        3.1.5 基因的生物学分析
        3.1.6 c DNA合成及荧光定量PCR
    3.2 结果与分析
        3.2.1 hsd11b1l和 hsd11b2 克隆和序列分析
        3.2.2 多序列比对和系统进化树分析
        3.2.3 hsd11b1l和 hsd11b2 在半滑舌鳎组织中的表达模式
        3.2.4 hsd11b1l和 hsd11b2 在性腺发育过程中的表达模式
        3.2.5 在半滑舌鳎性别分化过程中高温胁迫后hsd11b1l和 hsd11b2 表达的变化
    3.3 讨论
第四章 结论
参考文献
科研成果
致谢



本文编号：3677118