罗非鱼源无乳链球菌RovS转录调节因子缺失突变株的构建及其功能分析
发布时间：2022-08-13 17:10
无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）是唯一拥有B群特异性抗原的链球菌,也是一种人畜共患、传染性极强的的病原菌。近年来,由无乳链球菌感染罗非鱼引起的链球菌病,由于其发病快,死亡率高,且疾病一旦爆发很难控制,使其严重危害罗非鱼养殖业的健康发展,并给全球罗非鱼的养殖业带来了巨大的经济损失。RovS转录调节因子属于Rgg家族,是无乳链球菌中一个重要的调节因子,能够在转录上调控细菌基因组中多个基因的表达,同时还能够与细菌中其他调控系统协同作用,调控细菌的生长、繁殖及代谢等生命活动。本研究以罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910 RovS转录调节因子为研究对象,通过构建rovS基因缺失突变株,比较野生株和突变株的生物学性状,研究其致病力及相关毒力因子的表达情况,为进一步探讨罗非鱼源无乳链球菌的分子致病机理奠定了理论基础。利用PCR技术扩增rovS基因上下游同源片段rovS-F、rovS-R,以及红霉素抗性基因Erm,然后利用温度敏感型自杀载体pSET4s构建重组质粒pSET4s-rF-Erm-r R,通过电转化的方法将重组质粒转入野生株S.agalactiae ZQ0910中,通...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
1 文献综述
1.1 无乳链球菌的研究进展
1.1.1 无乳链球菌的概述
1.1.2 无乳链球菌的流行性
1.1.3 无乳链球菌的致病性
1.1.4 无乳链球菌的感染症状
1.2 无乳链球菌相关毒力因子
1.2.1 荚膜多糖
1.2.2 分选酶
1.2.3 ScpB蛋白
1.2.4 Sip蛋白
1.2.5 FbsA蛋白
1.2.6 SodA蛋白
1.3 调节因子
1.3.1 Rgg家族调节因子
1.3.2 CodY全局转录调节因子
1.3.3 CcpA全局调节因子
1.3.4 LuxS调节因子
1.4 本研究的目的意义
2 转录调节因子RovS基因缺失株的构建
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 质粒
2.1.3 主要实验试剂
2.1.4 培养基和相关溶液的配制
2.1.5 缓冲液的配制
2.1.6 制备大肠杆菌感受态所用溶液的配置
2.1.7 制备无乳链球菌感受态所用溶液的配置
2.1.8 该实验所用引物
2.1.9 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 rovS基因上、下游片段与Erm基因的扩增
2.2.2 rovS基因上、下游片段与Erm基因的融合
2.2.3 重组质粒pSET4s-rF-Erm-rR的构建和鉴定
2.2.4 rovS基因缺失株突变株的构建
2.3 实验结果
2.3.1 rovS基因上、下游片段的扩增
2.3.2 红霉素抗性基因的扩增
2.3.3 rovS基因上、下游片段与Erm基因的融合
2.3.4 重组质粒pSET4s-rF-Erm-rR的鉴定
2.3.5 无乳链球菌rovS基因缺失株的筛选
2.4 讨论
3 转录调节因子RovS的功能分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株
3.1.2 实验动物
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验试剂
3.1.5 革兰氏染色液的配置
3.2 实验方法
3.2.1 突变株的遗传稳定性分析
3.2.2 生长曲线的绘制
3.2.3 野生株S.agalactiae ZQ0910和突变株ΔrovS革兰氏染色的比较
3.2.4 血琼脂平板上观察细菌形态
3.2.5 半数致死量（LD50）的测定
3.2.6 实时荧光定量PCR
3.3 实验结果
3.3.1 突变株遗传稳定性分析
3.3.2 生长曲线的比较
3.3.3 革兰氏染色的比较
3.3.4 血琼脂平板上生物学性状的比较
3.3.5 半数致死量（LD50）的测定
3.3.6 mRNA的表达差异
3.4 讨论
4 结论
4.1 罗非鱼源无乳链球菌转录调节子RovS缺失株的构建
4.2 缺失突变株 ΔrovS功能分析
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
本文编号：3677424
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
1 文献综述
1.1 无乳链球菌的研究进展
1.1.1 无乳链球菌的概述
1.1.2 无乳链球菌的流行性
1.1.3 无乳链球菌的致病性
1.1.4 无乳链球菌的感染症状
1.2 无乳链球菌相关毒力因子
1.2.1 荚膜多糖
1.2.2 分选酶
1.2.3 ScpB蛋白
1.2.4 Sip蛋白
1.2.5 FbsA蛋白
1.2.6 SodA蛋白
1.3 调节因子
1.3.1 Rgg家族调节因子
1.3.2 CodY全局转录调节因子
1.3.3 CcpA全局调节因子
1.3.4 LuxS调节因子
1.4 本研究的目的意义
2 转录调节因子RovS基因缺失株的构建
2.1 实验材料
2.1.1 菌株
2.1.2 质粒
2.1.3 主要实验试剂
2.1.4 培养基和相关溶液的配制
2.1.5 缓冲液的配制
2.1.6 制备大肠杆菌感受态所用溶液的配置
2.1.7 制备无乳链球菌感受态所用溶液的配置
2.1.8 该实验所用引物
2.1.9 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 rovS基因上、下游片段与Erm基因的扩增
2.2.2 rovS基因上、下游片段与Erm基因的融合
2.2.3 重组质粒pSET4s-rF-Erm-rR的构建和鉴定
2.2.4 rovS基因缺失株突变株的构建
2.3 实验结果
2.3.1 rovS基因上、下游片段的扩增
2.3.2 红霉素抗性基因的扩增
2.3.3 rovS基因上、下游片段与Erm基因的融合
2.3.4 重组质粒pSET4s-rF-Erm-rR的鉴定
2.3.5 无乳链球菌rovS基因缺失株的筛选
2.4 讨论
3 转录调节因子RovS的功能分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株
3.1.2 实验动物
3.1.3 实验仪器
3.1.4 实验试剂
3.1.5 革兰氏染色液的配置
3.2 实验方法
3.2.1 突变株的遗传稳定性分析
3.2.2 生长曲线的绘制
3.2.3 野生株S.agalactiae ZQ0910和突变株ΔrovS革兰氏染色的比较
3.2.4 血琼脂平板上观察细菌形态
3.2.5 半数致死量（LD50）的测定
3.2.6 实时荧光定量PCR
3.3 实验结果
3.3.1 突变株遗传稳定性分析
3.3.2 生长曲线的比较
3.3.3 革兰氏染色的比较
3.3.4 血琼脂平板上生物学性状的比较
3.3.5 半数致死量（LD50）的测定
3.3.6 mRNA的表达差异
3.4 讨论
4 结论
4.1 罗非鱼源无乳链球菌转录调节子RovS缺失株的构建
4.2 缺失突变株 ΔrovS功能分析
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
本文编号：3677424
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