草鱼（Ctenopharyngodon idellus）Sp1的克隆及其表达研究

发布时间：2022-09-27 20:05

　　转录因子Sp1（Specificity protein1）可调控多种基因的激活，参与多数细胞的生长分化和细胞周期代谢，与肿瘤的发生密切相关。本研究利用T-A和RACE技术从草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肠道克隆出Sp1cDNA全序列，采用实时荧光定量PCR技术检测了草鱼不同组织、不同发育时期Sp1基因的表达，并探讨了在日粮中添加不同蛋白源、不同蛋白水平和谷氨酰胺二肽等营养素对草鱼Sp1基因表达的调控。 1、草鱼Sp1cDNA克隆及生物信息学分析 草鱼Sp1cDNA全长为1914bp，包括1482bp的编码区、5bp的5’UTR和426bp的3’UTR，共编码493个氨基酸。等电点为8.27，主要的元素成分含量为C：2.23%，N：4.87%，H：2.43%，S：9.94%，T：11.16%。分子式为C2237H3600N662O738S20。氨基酸组成中，Thr（11.2%）和Gln（10.1%）含量相对较高。氨基酸序列的疏水性：MAX，2.93；MIN，-1.89。磷酸化位点：Ser21个，Thr7个，Tyr2个。系统进化分析表明Sp1在进化上比... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语中英文对照
第一章 引言
    1.1 研究背景与意义
    1.2 SP 家族
        1.2.1 Sp 家族简介
        1.2.2 Sp 家族基本结构和功能位点
    1.3 SP1 基因
        1.3.1 Sp1 的结构与功能特征
        1.3.2 Sp1 表达及其功能的调控
        1.3.3 Sp1 转录活性的调节
        1.3.4 Sp1 在肠道中的作用
    1.4 论文创新点
第二章 草鱼 SP1 基因克隆及生物信息学分析
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 总 RNA 制备
        2.2.2 Sp1 cDNA 中间核心片段克隆
        2.2.3 Sp1 cDNA 3'端片段扩增和克隆
        2.2.4 Sp1 cDNA 5'端片段扩增和克隆
        2.2.5 Sp1 cDNA 全序列拼接
        2.2.6 草鱼 Sp1 全长氨基酸序列和蛋白结构分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 肠道总 RNA 提取
        2.3.2 Sp1 cDNA 克隆
        2.3.3 Sp1 生物信息学分析
    2.4 讨论
第三章 草鱼 SP1 的时空表达分析
    3.1 材料
        3.1.1 实验动物及取材
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 Sp1 基因表达量的检测
        3.2.1 引物设计
        3.2.2 总 RNA 提取
        3.2.3 模板 cDNA 第一链合成
        3.2.4 Sp1 基因表达检测
    3.3 数据处理
    3.4 结果与分析
        3.4.1 模板 cDNA 制备效果
        3.4.2 Sp1 mRNA 表达分析
    3.5 讨论
第四章 外源蛋白对草鱼肠道 SP1 基因表达的影响
    4.1 材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 方法
        4.2.1 实验设计
        4.2.2 引物设计
        4.2.3 总 RNA 提取
        4.2.4 cDNA 第一链合成
        4.2.5 Sp1 基因表达量检测
    4.3 数据处理
    4.4 结果分析
        4.4.1 不同蛋白源对草鱼肠道 Sp1 mRNA 表达的影响
        4.4.2 不同蛋白水平对草鱼肠道 Sp1 mRNA 表达的影响
    4.5 讨论
第五章 谷氨酰胺二肽对草鱼肠道 SP1 基因表达的影响
    5.1 材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 方法
        5.2.1 实验设计
        5.2.2 引物设计
        5.2.3 总 RNA 提取
        5.2.4 cDNA 第一链合成
        5.2.5 Sp1 基因表达检测
    5.3 数据处理
    5.4 结果分析
        5.4.1 不同剂量谷氨酰胺二肽对草鱼肠道 Sp1mRNA 表达的影响
    5.5 讨论
小结
参考文献
致谢
攻读学位期间学术业绩


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3681535