转Cry1Ab/Ac基因抗虫水稻及其毒蛋白对泥鳅的影响及安全性评价
发布时间：2022-09-28 20:00
本研究通过大田放养、花粉饲喂、稻杆粉作用3种方式，以成年泥鳅机体Cry1Ab/Ac蛋白含量、生长发育、生理酶活性、血常规与红细胞核及组织学为试验指标，以非转基因亲本水稻明恢63（MH63）为对照，评价了转Cry1Ab/Ac抗虫水稻华恢1号（HH1）对泥鳅的安全性影响。试验取得了以下研究结果： 一、转Cry1Ab/Ac抗虫水稻及泥鳅不同器官中的毒蛋白含量 采用双抗体夹心ELISA方法，选用EnvirLogix公司Cry1Ab/Ac试剂盒，分别检测不同生长期的水稻。结果表明HH1水稻不同器官（根、茎、叶、花、种子）良好的表达了Cry1Ab/Ac蛋白，在生长周期中呈现为成熟期＞扬花期＞拔节期。 水稻拔节、扬花和成熟时，HH1水稻田间泥鳅的鳃、肠、胃、肌肉和性腺中Cry1Ab/Ac蛋白含量均低于最低检测值0.2ng/g。 二、转Cry1Ab/Ac抗虫水稻对泥鳅生长性能的影响 通过鲜重称量，结合生物参数计算公式，统计结果显示，2012年HH1稻田环境对泥鳅的增重率、肥满度、内脏系数、肝体比和成熟系数没有影响（P＞0.05）。2013年于HH1水稻拔节期、扬花期、成熟...
【文章页数】：120 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 Bt 蛋白
1.1.1 苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白
1.1.2 Bt 蛋白的分类与命名
1.1.3 Bt 蛋白杀虫的作用机理
1.1.4 Bt 蛋白检测方法
1.2 转 Bt 基因抗虫水稻研究现状
1.2.1 转 Bt 基因抗虫水稻培育
1.2.2 转 Bt 基因抗虫水稻的抗性评价
1.3 转 Bt 基因抗虫水稻的生态安全性研究进展
1.3.1 转 Bt 基因抗虫水稻对非靶标动物的影响
1.3.2 转 Bt 基因抗虫水稻花粉漂移及安全性影响
1.3.3 转 Bt 基因抗虫稻田土壤残留及安全性研究
1.4 选题依据、研究意义及技术路线
1.4.1 目的和意义
1.4.2 技术路线
第二章 转 Cry1Ab/Ac 水稻及田间泥鳅不同器官中的毒蛋白含量
2.1 材料与方法
2.1.1 供试稻种与泥鳅
2.1.2 水稻种植与泥鳅放养
2.1.3 样品采集与稻田水体 pH 测定
2.1.4 Bt 蛋白含量检测
2.1.5 仪器设备与试剂
2.1.6 数据统计与分析方法
2.2 结果
2.2.1 稻田水体环境的 pH 值
2.2.2 水稻不同器官在不同生长期 Cry1Ab/Ac 蛋白的表达量
2.2.3 泥鳅不同器官中 Cry1Ab/Ac 蛋白含量检测
2.3 结论
第三章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅生长性能的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 供试水稻
3.1.2 供试花粉
3.1.3 供试稻杆粉
3.1.4 转 Cry1Ab/Ac 抗虫稻田环境对泥鳅的毒性试验设计
3.1.5 饲料中添加花粉对泥鳅的毒性试验设计
3.1.6 添加稻杆粉在水体中对泥鳅的毒性试验设计
3.1.7 测定方法
3.1.8 参数计算
3.1.9 仪器设备与实验用品
3.1.10 数据统计与分析方法
3.2 结果
3.2.1 转 Cry1Ab/Ac 水稻环境对泥鳅生长情况的影响
3.2.2 饲料中添加花粉对泥鳅生长情况的影响
3.2.3 稻杆粉对试验水环境 pH、溶解氧的影响
3.2.4 稻杆粉对泥鳅生长情况的影响
3.3 结论
第四章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅酶活性的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 供试材料
4.1.2 粗酶液提取
4.1.3 酶活检测方法
4.1.4 仪器设备
4.1.5 数据统计与分析方法
4.2 结果
4.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅抗氧化酶的影响
4.2.1.1 稻田环境对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.1.2 花粉对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.1.3 稻杆粉对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅解毒酶的影响
4.2.2.1 稻田环境对泥鳅 GST 酶的影响
4.2.2.2 花粉对泥鳅 GST 酶活性的影响
4.2.2.3 稻杆粉对泥鳅 GST 酶的影响
4.2.3 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.1 稻田环境对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.2 花粉对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.3 稻杆粉对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.4 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.1 稻田环境对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.2 花粉对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.3 稻杆粉对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.3 结论
第五章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血常规及血红细胞核的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 供试材料
5.1.2 血常规测定
5.1.3 血涂片制作
5.1.4 仪器设备与药品试剂
5.1.5 数据统计与分析方法
5.2 结果
5.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血红蛋白的影响
5.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅高铁血红蛋白的影响
5.2.3 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血红细胞核的影响
5.2.4 花粉对泥鳅血红细胞核的影响
5.2.5 稻杆粉对泥鳅血红细胞核的影响
5.3 小结
第六章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅性腺组织的影响
6.1 材料与方法
6.1.1 供试材料
6.1.2 石蜡切片制作方法
6.1.3 仪器设备与药品试剂
6.2 结果
6.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅卵巢的影响
6.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅精巢的影响
6.3 小结
第七章 结论与讨论
参考文献
致谢
附录 A
附录 B
附录 C
附录 D
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bt水稻田重要非靶标节肢动物暴露于Cry2Aa蛋白的程度分析[J]. 张青玲,李云河,华红霞,杨长举,武红巾,彭于发. 应用生态学报. 2013(06)
[2]Cry1Ab蛋白在蜘蛛体内的富集及对蜘蛛相关酶活性的影响[J]. 周颖,魏宝阳,王智,李超民,罗翔宇,肖安琪. 湖南农业科学. 2013(07)
[3]转cry1Ab/cry1Ac基因水稻对大螟幼虫的取食、生长及存活的影响[J]. 郭文娟,陆驰宇,熊应强,马鹤娟,李绍勤. 应用昆虫学报. 2013(01)
[4]不同地区转Bt基因抗虫水稻稻谷对赤拟谷盗生长发育的影响[J]. 姚英娟,徐雪亮,严寒,蔡万伦,林拥军,华红霞. 应用昆虫学报. 2012(06)
[5]转基因水稻Bt汕优63种植两年对土壤线虫群落的影响[J]. 李修强,陈法军,刘满强,陈小云,胡锋. 应用生态学报. 2012(11)
[6]氨氮对泥鳅的急性毒性及对其肝、鳃组织超微结构的影响[J]. 郝小凤,刘洋,凌去非. 水生态学杂志. 2012(05)
[7]不同蛋白质和脂肪水平对1龄团头鲂生长性能和体组成的影响[J]. 蒋阳阳,李向飞,刘文斌,吴阳,李贵锋,朱浩. 水生生物学报. 2012(05)
[8]Effect of vegetation of transgenic Bt rice lines and their straw amendment on soil enzymes, respiration, functional diversity and community structure of soil microorganisms under field conditions[J]. Hua Fang1,2, Bin Dong1,3, Hu Yan1, Feifan Tang1, Baichuan Wang1, Yunlong Yu1,2, 1. Institute of Pesticide and Environmental Toxicology, College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China. 2. Key Laboratory of Molecular Biology of Crop Pathogens and Insects, Ministry of Agriculture, Hangzhou 310058, China 3. Agricultural Service Center, Qidu, Wujiang 215234, China. Journal of Environmental Sciences. 2012(07)
[9]苏丹红Ⅲ对泥鳅的急性毒性、遗传及生理毒性研究[J]. 常重杰,王君,肖静,王琼琼,杜启艳. 水生态学杂志. 2012(04)
[10]转Cry1Ab和Cry1Ac融合基因型抗虫水稻对田间二化螟和大螟种群发生动态的影响[J]. 李志毅,隋贺,徐艳博,韩兰芝,陈法军. 生态学报. 2012(06)
博士论文
[1]Bt抗虫水稻的培育[D]. 唐微.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]CrylAb蛋白在转基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽间的传递路径[D]. 安飞.福建农林大学 2013
[2]Bt水稻对蜘蛛生长发育和繁殖的初步研究[D]. 肖凯夫.湖南农业大学 2012
[3]转cry2Aa基因抗虫水稻对中华通草蛉的潜在影响[D]. 王园园.中国农业科学院 2012
[4]转基因水稻中Bt蛋白的表达规律及生态适应性研究[D]. 华桦.华中农业大学 2012
[5]转基因生物Bt蛋白降解技术研究[D]. 乔文静.西南大学 2010
[6]苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定[D]. 吴会贤.河北农业大学 2007
[7]苏云金杆菌三个亚种和两个工程菌株杀虫晶体蛋白的比较蛋白质组研究[D]. 黄江丽.湖南师范大学 2006
本文编号：3682292
【文章页数】：120 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 Bt 蛋白
1.1.1 苏云金芽孢杆菌及其杀虫晶体蛋白
1.1.2 Bt 蛋白的分类与命名
1.1.3 Bt 蛋白杀虫的作用机理
1.1.4 Bt 蛋白检测方法
1.2 转 Bt 基因抗虫水稻研究现状
1.2.1 转 Bt 基因抗虫水稻培育
1.2.2 转 Bt 基因抗虫水稻的抗性评价
1.3 转 Bt 基因抗虫水稻的生态安全性研究进展
1.3.1 转 Bt 基因抗虫水稻对非靶标动物的影响
1.3.2 转 Bt 基因抗虫水稻花粉漂移及安全性影响
1.3.3 转 Bt 基因抗虫稻田土壤残留及安全性研究
1.4 选题依据、研究意义及技术路线
1.4.1 目的和意义
1.4.2 技术路线
第二章 转 Cry1Ab/Ac 水稻及田间泥鳅不同器官中的毒蛋白含量
2.1 材料与方法
2.1.1 供试稻种与泥鳅
2.1.2 水稻种植与泥鳅放养
2.1.3 样品采集与稻田水体 pH 测定
2.1.4 Bt 蛋白含量检测
2.1.5 仪器设备与试剂
2.1.6 数据统计与分析方法
2.2 结果
2.2.1 稻田水体环境的 pH 值
2.2.2 水稻不同器官在不同生长期 Cry1Ab/Ac 蛋白的表达量
2.2.3 泥鳅不同器官中 Cry1Ab/Ac 蛋白含量检测
2.3 结论
第三章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅生长性能的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 供试水稻
3.1.2 供试花粉
3.1.3 供试稻杆粉
3.1.4 转 Cry1Ab/Ac 抗虫稻田环境对泥鳅的毒性试验设计
3.1.5 饲料中添加花粉对泥鳅的毒性试验设计
3.1.6 添加稻杆粉在水体中对泥鳅的毒性试验设计
3.1.7 测定方法
3.1.8 参数计算
3.1.9 仪器设备与实验用品
3.1.10 数据统计与分析方法
3.2 结果
3.2.1 转 Cry1Ab/Ac 水稻环境对泥鳅生长情况的影响
3.2.2 饲料中添加花粉对泥鳅生长情况的影响
3.2.3 稻杆粉对试验水环境 pH、溶解氧的影响
3.2.4 稻杆粉对泥鳅生长情况的影响
3.3 结论
第四章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅酶活性的影响
4.1 材料与方法
4.1.1 供试材料
4.1.2 粗酶液提取
4.1.3 酶活检测方法
4.1.4 仪器设备
4.1.5 数据统计与分析方法
4.2 结果
4.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅抗氧化酶的影响
4.2.1.1 稻田环境对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.1.2 花粉对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.1.3 稻杆粉对泥鳅 SOD、CAT 酶的影响
4.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅解毒酶的影响
4.2.2.1 稻田环境对泥鳅 GST 酶的影响
4.2.2.2 花粉对泥鳅 GST 酶活性的影响
4.2.2.3 稻杆粉对泥鳅 GST 酶的影响
4.2.3 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.1 稻田环境对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.2 花粉对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.3.3 稻杆粉对泥鳅蛋白水解酶的影响
4.2.4 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.1 稻田环境对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.2 花粉对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.2.4.3 稻杆粉对泥鳅乙酰胆碱酯酶的影响
4.3 结论
第五章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血常规及血红细胞核的影响
5.1 材料与方法
5.1.1 供试材料
5.1.2 血常规测定
5.1.3 血涂片制作
5.1.4 仪器设备与药品试剂
5.1.5 数据统计与分析方法
5.2 结果
5.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血红蛋白的影响
5.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅高铁血红蛋白的影响
5.2.3 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅血红细胞核的影响
5.2.4 花粉对泥鳅血红细胞核的影响
5.2.5 稻杆粉对泥鳅血红细胞核的影响
5.3 小结
第六章 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅性腺组织的影响
6.1 材料与方法
6.1.1 供试材料
6.1.2 石蜡切片制作方法
6.1.3 仪器设备与药品试剂
6.2 结果
6.2.1 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅卵巢的影响
6.2.2 转 Cry1Ab/Ac 抗虫水稻对泥鳅精巢的影响
6.3 小结
第七章 结论与讨论
参考文献
致谢
附录 A
附录 B
附录 C
附录 D
【参考文献】：
期刊论文
[1]Bt水稻田重要非靶标节肢动物暴露于Cry2Aa蛋白的程度分析[J]. 张青玲,李云河,华红霞,杨长举,武红巾,彭于发. 应用生态学报. 2013(06)
[2]Cry1Ab蛋白在蜘蛛体内的富集及对蜘蛛相关酶活性的影响[J]. 周颖,魏宝阳,王智,李超民,罗翔宇,肖安琪. 湖南农业科学. 2013(07)
[3]转cry1Ab/cry1Ac基因水稻对大螟幼虫的取食、生长及存活的影响[J]. 郭文娟,陆驰宇,熊应强,马鹤娟,李绍勤. 应用昆虫学报. 2013(01)
[4]不同地区转Bt基因抗虫水稻稻谷对赤拟谷盗生长发育的影响[J]. 姚英娟,徐雪亮,严寒,蔡万伦,林拥军,华红霞. 应用昆虫学报. 2012(06)
[5]转基因水稻Bt汕优63种植两年对土壤线虫群落的影响[J]. 李修强,陈法军,刘满强,陈小云,胡锋. 应用生态学报. 2012(11)
[6]氨氮对泥鳅的急性毒性及对其肝、鳃组织超微结构的影响[J]. 郝小凤,刘洋,凌去非. 水生态学杂志. 2012(05)
[7]不同蛋白质和脂肪水平对1龄团头鲂生长性能和体组成的影响[J]. 蒋阳阳,李向飞,刘文斌,吴阳,李贵锋,朱浩. 水生生物学报. 2012(05)
[8]Effect of vegetation of transgenic Bt rice lines and their straw amendment on soil enzymes, respiration, functional diversity and community structure of soil microorganisms under field conditions[J]. Hua Fang1,2, Bin Dong1,3, Hu Yan1, Feifan Tang1, Baichuan Wang1, Yunlong Yu1,2, 1. Institute of Pesticide and Environmental Toxicology, College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China. 2. Key Laboratory of Molecular Biology of Crop Pathogens and Insects, Ministry of Agriculture, Hangzhou 310058, China 3. Agricultural Service Center, Qidu, Wujiang 215234, China. Journal of Environmental Sciences. 2012(07)
[9]苏丹红Ⅲ对泥鳅的急性毒性、遗传及生理毒性研究[J]. 常重杰,王君,肖静,王琼琼,杜启艳. 水生态学杂志. 2012(04)
[10]转Cry1Ab和Cry1Ac融合基因型抗虫水稻对田间二化螟和大螟种群发生动态的影响[J]. 李志毅,隋贺,徐艳博,韩兰芝,陈法军. 生态学报. 2012(06)
博士论文
[1]Bt抗虫水稻的培育[D]. 唐微.华中农业大学 2006
硕士论文
[1]CrylAb蛋白在转基因水稻—褐飞虱—黑肩绿盲蝽间的传递路径[D]. 安飞.福建农林大学 2013
[2]Bt水稻对蜘蛛生长发育和繁殖的初步研究[D]. 肖凯夫.湖南农业大学 2012
[3]转cry2Aa基因抗虫水稻对中华通草蛉的潜在影响[D]. 王园园.中国农业科学院 2012
[4]转基因水稻中Bt蛋白的表达规律及生态适应性研究[D]. 华桦.华中农业大学 2012
[5]转基因生物Bt蛋白降解技术研究[D]. 乔文静.西南大学 2010
[6]苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定[D]. 吴会贤.河北农业大学 2007
[7]苏云金杆菌三个亚种和两个工程菌株杀虫晶体蛋白的比较蛋白质组研究[D]. 黄江丽.湖南师范大学 2006
本文编号：3682292
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