基于非油乳佐剂的大菱鲆鳗弧菌和杀鲑气单胞菌灭活疫苗开发

发布时间：2022-10-29 14:34

　　鳗弧菌和杀鲑气单胞菌是水产养殖中两种常见的病原菌,导致世界各地的水产养殖业蒙受巨大损失。疫苗接种是预防各类养殖病害最为有效的措施之一。考虑到安全性、功效和成本等因素,鱼用疫苗目前仍以灭活疫苗为主。然而,灭活疫苗免疫保护效果常不尽人意,需通过添加佐剂来增强疫苗效果。尽管常规商业化鱼用佐剂仍以油佐剂为主,但油佐剂会引起内脏黏连、佐剂残留和生长抑制等副作用。因此,对于鱼用疫苗的研制,开发副作用更为温和的非油佐剂是十分必要的。本论文首先基于三种CpG ODNs构建了 pCpG佐剂,以大菱鲆为实验动物,考察了该pCpG佐剂配合鳗弧菌灭活疫苗的免疫保护效果。结果表明,pCpG佐剂可提高鳗弧菌灭活疫苗免疫保护效果,且佐剂剂量与疫苗免疫效应非正相关。同时,pCpG佐剂可有效降低鳗弧菌灭活疫苗抗原含量,在低剂量抗原免疫下为大菱鲆提供了高达84%的RPS,较无佐剂疫苗组增加43%。对体内免疫应答的检测结果表明pCpG佐剂可以有效提高大菱鲆体内抗体水平并激活固有免疫和适应性免疫应答。由此可见,pCpG佐剂可作为后续鱼用疫苗开发的候选佐剂种类。另外,本论文还基于铝佐剂制备了杀鲑气单胞菌灭活疫苗,并以大菱鲆为实... 

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 水产养殖及其病害
        1.1.1 鳗弧菌
        1.1.2 杀鲑气单胞菌
        1.1.3 水产养殖病害防治
    1.2 鱼用疫苗
        1.2.1 灭活疫苗
        1.2.2 减毒活疫苗
        1.2.3 亚单位疫苗
        1.2.4 DNA疫苗
    1.3 免疫方式
        1.3.1 注射免疫
        1.3.2 浸泡免疫
        1.3.3 口服免疫
    1.4 鱼用疫苗佐剂
        1.4.1 油佐剂
        1.4.2 铝佐剂
        1.4.3 CpG佐剂
        1.4.4 其他佐剂
    1.5 本课题研究内容及意义
第2章 pCpG佐剂鳗弧菌灭活疫苗的免疫活性
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物及菌株
        2.2.2 CpG序列及载体质粒
        2.2.3 实验所用试剂
        2.2.4 培养基及实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 大菱鲆的驯养及日常检查
        2.3.2 鳗弧菌对大菱鲆的攻毒实验
        2.3.3 pCpG菌株的构建
        2.3.4 pCpG佐剂的提取
        2.3.5 含pCpG佐剂疫苗的制备
        2.3.6 不同剂量pCpG佐剂疫苗的免疫实验
    2.4 结果分析
        2.4.1 鳗弧菌在大菱鲆上的攻毒剂量确定
        2.4.2 pCpG佐剂的构建
        2.4.3 不同剂量pCpG佐剂疫苗的免疫效果
    2.5 实验讨论
    2.6 本章小结
第3章 pCpG佐剂的低剂量抗原疫苗的免疫效果
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物和实验菌株
        3.2.2 实验相关试剂和引物
    3.3 实验方法
        3.3.1 pCpG佐剂搭配低剂量疫苗的免疫实验
        3.3.2 大菱鲆免疫后血清各参数的检测
        3.3.3 大菱鲆免疫后脾脏内基因的表达
        3.3.4 副作用及体内表达情况的检测
    3.4 实验结果
        3.4.1 pCpG佐剂搭配低剂量疫苗的相对免疫保护率
        3.4.2 免疫后血清抗体,SOD和总蛋白的含量变化
        3.4.3 脾脏相关基因的表达水平
        3.4.4 pCpG佐剂的副作用及体内表达情况
    3.5 实验讨论
    3.6 本章小结
第4章 基于铝胶佐剂的杀鲑气单胞菌灭活疫苗
    4.1 引言
    4.2 实验材料
    4.3 实验方法
        4.3.1 菌株的分离鉴定及保种
        4.3.2 杀鲑气单胞菌对大菱鲆的攻毒实验
        4.3.3 铝胶佐剂的制备
        4.3.4 不同佐剂疫苗的免疫实验
        4.3.5 免疫指标的检测
    4.4 实验结果
        4.4.1 杀鲑气单胞菌的鉴定
        4.4.2 杀鲑气单胞菌在大菱鲆上的攻毒剂量确定
        4.4.3 杀鲑气单胞菌疫苗的免疫保护力
        4.4.4 免疫后血清中抗体水平变化
        4.4.5 两种佐剂的副作用
    4.5 实验讨论
    4.6 本章小结
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
论文发表情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]首个草鱼出血病活疫苗获国家一类新兽药证书[J].   农民科技培训. 2011(04)
[2]养殖大菱鲆病原菌——杀鲑气单胞菌无色亚种的分离鉴定和组织病理学研究[J]. 吕俊超,张晓华,王燕,兰建新,韩茵,刘云.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2009(01)



本文编号：3697864