特异性卵黄抗体对灿烂弧菌感染仿刺参的保护作用研究

发布时间：2022-12-10 20:17

　　“腐皮综合征”因其高感染率和高死亡率,被认为是危害仿刺参养殖的最严重疾病之一。灿烂弧菌（Vibrio splendidus）是引起“腐皮综合征”的主要致病菌之一,且感染范围广,致病性强。目前,对该病的防治主要依靠抗生素和化学药物,但药物的长期大量使用甚至滥用,不仅导致耐药性菌株的出现,而且还会影响食品安全和生态平衡,间接严重危害人类健康。本研究以灭活灿烂弧菌为抗原,免疫蛋鸡制备特异性卵黄抗体（IgY）。酶联免疫吸附实验测定特异性IgY最高效价达1：320000。经水稀释-冻融-两步盐析-超滤分离纯化IgY,最终获得抗体纯度达83%。液体和固体两种培养条件下,特异性IgY能显著抑制灿烂弧菌的生长（P＜0.05）并有效防止该菌在培养基上的黏附,表明IgY具有黏附阻滞作用。结晶紫染色法和微生物碳氢吸附能力实验表明,特异性IgY能显著降低灿烂弧菌的被膜形成能力和表面疏水性（P＜0.05）,进而减弱其黏附力,降低其致病性。免疫荧光电镜、扫描电镜和透射电镜观察显示,特异性IgY与抗原菌亲和力强,且能凝集抗原菌,并使菌体表面结构变得粗糙,改变其细胞表面结构,甚至影响菌体细胞壁完整性。特异性IgY与灿... 

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 IgY的特性及作用机制
        1.1.1 IgY的结构和功能
        1.1.2 IgY的理化性质及优势分析
        1.1.3 IgY的作用机制
    1.2 IgY在水产领域的应用
        1.2.1 IgY在细菌性水产疾病中的应用
        1.2.2 IgY在病毒性水产疾病中的应用
        1.2.3 IgY在水产品保鲜中的应用
        1.2.4 IgY在水产毒素及寄生虫诊断中的应用
    1.3 仿刺参“腐皮综合征”的研究进展
        1.3.1 发病症状和流行情况
        1.3.2 “腐皮综合征”病因分析
        1.3.3 “腐皮综合征”的防治
    1.4 本论文的研究意义
2 抗灿烂弧菌特异性IgY的制备
    2.1 前言
    2.2 实验材料及设备
        2.2.1 实验菌株
        2.2.2 实验动物
        2.2.3 实验试剂
        2.2.4 实验仪器
        2.2.5 实验溶液配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 抗原的制备
        2.3.2 蛋鸡的免疫
        2.3.3 IgY水溶性组分的提取
        2.3.4 酶联免疫吸附实验检测特异性IgY效价
        2.3.5 IgY的提纯
        2.3.6 IgY的蛋白质含量测定
        2.3.7 SDS-PAGE检测IgY的纯度
    2.4 结果
        2.4.1 抗原最佳包被浓度的确定
        2.4.2 ELISA检测抗灿烂弧菌特异性IgY效价检测结果
        2.4.3 BCA法测定蛋白质含量
        2.4.4 SDS-PAGE检测特异性IgY的纯度
    2.5 分析和讨论
    2.6 小结
3 特异性IgY与灿烂弧菌的体外作用研究
    3.1 前言
    3.2 实验材料及设备
        3.2.1 实验菌种
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 液体培养条件下IgY对灿烂弧菌的体外生长抑制实验
        3.3.2 固体培养条件下IgY对灿烂弧菌的体外生长抑制实验
        3.3.3 IgY对灿烂弧菌生物被膜形成的影响
        3.3.4 IgY对灿烂弧菌疏水性的影响
        3.3.5 透射电镜、扫描电镜和免疫荧光电镜
        3.3.6 IgY对灿烂弧菌细胞壁完整性的影响
        3.3.7 统计分析
    3.4 结果
        3.4.1 液体培养条件下IgY的体外抑菌效果
        3.4.2 固体培养条件下IgY的体外抑菌效果
        3.4.3 IgY对灿烂弧菌生物被膜形成能力的影响
        3.4.4 IgY对灿烂弧菌表面疏水性的影响
        3.4.5 透射电镜观察
        3.4.6 免疫荧光电镜观察
        3.4.7 扫描电镜观察
        3.4.8 IgY对灿烂弧菌细胞壁完整性的影响
    3.5 分析与讨论
    3.6 小结
4 特异性IgY对灿烂弧菌感染仿刺参的保护效果研究
    4.1 前言
    4.2 实验材料及设备
        4.2.1 实验菌种
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
        4.2.4 溶液配制
        4.2.5 实验动物
    4.3 实验方法
        4.3.1 IgY注射治疗对仿刺参存活率的影响
        4.3.2 IgY浸浴治疗对仿刺参存活率的影响
        4.3.3 IgY浸浴预防对仿刺参存活率的影响
        4.3.4 IgY对仿刺参组织中载菌量的影响
        4.3.5 IgY对仿刺参吞噬细胞活性的影响
        4.3.6 IgY对仿刺参吞噬细胞活性的影响
        4.3.7 IgY对仿刺参免疫相关酶及因子的活性检测
        4.3.8 统计分析
    4.4 结果
        4.4.1 IgY注射治疗对仿刺参存活率的影响
        4.4.2 IgY浸浴治疗对仿刺参存活率的影响
        4.4.3 IgY浸浴预防对仿刺参存活率的影响
        4.4.4 IgY对仿刺参组织中载菌量的影响
        4.4.5 IgY对仿刺参吞噬细胞活性的影响
        4.4.6 IgY对仿刺参免疫相关酶及因子的活性影响
    4.5 分析与讨论
    4.6 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]海水养殖细菌性病害检测方法研究进展[J]. 肖婧凡,王玥,张元兴,雷霁霖.  中国工程科学. 2014(09)
[2]刺参“腐皮综合征”研究进展[J]. 李强,孙康泰,张显昱.  中国农业科技导报. 2013(06)
[3]棘胸蛙嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及其保护作用研究[J]. 马有智,卢媛媛,何琳,徐海圣.  黑龙江畜牧兽医. 2013(17)
[4]腐败希瓦氏菌卵黄抗体活性片段的制备及抑菌效果的分析[J]. 张茜,林洪,党昕,隋建新,曹立民.  食品工业科技. 2013(13)
[5]脂多糖对鱼类免疫功能影响及其在水产饲料中应用展望[J]. 李盈锋,齐鑫,邵庆均.  饲料工业. 2012(10)
[6]嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备[J]. 于生兰,王帅兵,朱善元,徐建生,伍海波.  黑龙江畜牧兽医. 2011(23)
[7]海参疾病学研究进展[J]. 张春云,陈国福,徐仲,闫培生,王印庚.  水产科学. 2011(10)
[8]灿烂弧菌的疏水性和生物被膜形成能力[J]. 李华,王扬,李强,乔帼.  中国水产科学. 2011(05)
[9]复方中草药对仿刺参免疫力和抗病力的影响[J]. 吴亚楠,柳鹏,李强,姜传俊,李华.  大连海洋大学学报. 2011(04)
[10]冷藏牙鲆中主要腐败菌卵黄抗体的抑菌性能[J]. 胥亚夫,林洪,张茜,田良良,赵硕,隋建新,曹立民.  食品科学. 2010(23)

博士论文
[1]黄芪多糖促进刺参免疫力和生长性能的研究[D]. 孙永欣.大连理工大学 2008

硕士论文
[1]抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体对致病香鱼保护作用的研究[D]. 程娜.宁波大学 2014
[2]灿烂弧菌感染刺参过程中相关MicroRNA的克隆与表达研究[D]. 冯维达.宁波大学 2013
[3]应用噬菌体防治弧菌引发的刺参腐皮综合征[D]. 杨扬.大连理工大学 2013
[4]几种微生态制剂对刺参（Apostichopus japonicus）养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响[D]. 阳钢.中国海洋大学 2012
[5]雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 张彩霞.广东工业大学 2011
[6]致鱼细菌性败血症嗜水气单胞菌特异性卵黄抗体的制备及性能研究[D]. 邹栋良.大连理工大学 2010
[7]嗜水气单胞菌亚单位成分卵黄抗体在鳗鲡养殖中应用[D]. 庄政.福建农林大学 2008
[8]免疫增强剂及疫苗对刺参（Apostichopus japonicus）免疫酶活性及抗病力影响的初步研究[D]. 孔伟丽.中国海洋大学 2008
[9]养殖刺参“腐皮综合征”致病菌的鉴定及其灭活菌苗对刺参免疫作用的研究[D]. 周晓苏.中国海洋大学 2008
[10]养殖刺参（Apostichopus japonicus）腐皮综合症的发生与异养菌区系间的关系[D]. 黄华伟.中国海洋大学 2007



本文编号：3717446