中华绒螯蟹精子发生过程中组蛋白H1及其变体和分子伴侣的表达特征

发布时间：2023-01-05 11:19

　　中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）隶属节肢动物门（Arthropod）、甲壳纲（Crustacea）、十足目（Decapoda）、方蟹科（Grapsidae）,是我国重要的经济蟹类之一。雄性中华绒螯蟹精子核为非浓缩核,染色质不同于一般动物精子核的致密结构,且形成机制未知。组蛋白作为核小体的重要组成部分,其翻译后修饰产物、组蛋白变体对蛋白质和DNA结合程度、DNA转录水平产生影响,进而调控染色质或染色体的结构,发挥所需生物学功能。同时在体内,分子伴侣对组蛋白与DNA形成正确构象的核小体具有辅助作用。为探究中华绒螯蟹精子发生过程中非浓缩核形成的原因,本文以保守性低的组蛋白H1为切入点,研究其变体组蛋白H1.1等、分子伴侣核质蛋白1-假基因9（Nucleophosmin1 pseudogene9,NPM1P9）、核小体组装蛋白1样1（Nucleosome assembly protein 1 like 1,NAP1L1）在精子发生过程的表达和动态分布特征。同时,研究组蛋白H1与分子伴侣NPM1P9间的相互作用,旨在从分子和细胞水平进行全面探究。本研究利用分子克隆技术,构建H1... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 精子发生与精子核
        1.1.1 精子发生
        1.1.2 精子形态与精子核
    1.2 精子核碱性蛋白与核小体
        1.2.1 精子核碱性蛋白
        1.2.2 核小体结构
        1.2.3 连接组蛋白H1
    1.3 表观遗传相关内容
        1.3.1 表观遗传
        1.3.2 组蛋白变体
        1.3.3 组蛋白修饰
    1.4 分子伴侣
        1.4.1 组蛋白分子伴侣
        1.4.2 组蛋白H1与其分子伴侣
    1.5 单克隆抗体技术
        1.5.1 研究背景
        1.5.2 McAb的应用
    1.6 研究目的与意义
第二章 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1的表达与单克隆抗体的制备
    2.1 实验材料、试剂与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂与配方
        2.1.3 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 构建中华绒螯蟹H1和H1.1基因的表达载体
        2.2.2 原核表达中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1
        2.2.3 制备McAb-H1和McAb-H1.1
    2.3 实验结果
        2.3.1 中华绒螯蟹H1和H1.1基因的表达
        2.3.2 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1的表达与纯化
        2.3.3 ELISA优化与McAb-H1和McAb-H1.1的特性
    2.4 讨论
第三章 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1的表达特征
    3.1 实验材料、试剂与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂与配方
        3.1.3 主要实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 Western blot探究组蛋白H1和H1.1在中华绒螯蟹精巢、精子中的表达
        3.2.2 免疫荧光探究中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1在精子发生过程中的定位
        3.2.3 实时荧光定量PCR探究中华绒螯蟹H1和H1.1基因的相对表达
        3.2.4 利用生物信息学分析中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1
    3.3 实验结果
        3.3.1 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1在精巢、精子中的表达
        3.3.2 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1在精子发生过程中的定位
        3.3.3 中华绒螯蟹H1和H1.1基因的相对表达
        3.3.4 中华绒螯蟹组蛋白H1和H1.1的生物信息学分析结果
    3.4 讨论
第四章 中华绒螯蟹组蛋白H1的分子伴侣
    4.1 实验材料、试剂与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂与配方
        4.1.3 主要实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 构建中华绒螯蟹NPM1P9基因的表达载体
        4.2.2 Western blot探究中华绒螯蟹NPM1P9在精巢、精子中的表达
        4.2.3 免疫荧光探究中华绒螯蟹NPM1P9、NAP1L1在精子发生过程中的定位
        4.2.4 免疫共沉淀探究中华绒螯蟹组蛋白H1与NPM1P9 间的相互作用
        4.2.5 原核表达中华绒螯蟹NPM1P9蛋白
    4.3 实验结果
        4.3.1 中华绒螯蟹NPM1P9基因的克隆
        4.3.2 中华绒螯蟹NPM1P9在精巢、精子中的表达
        4.3.3 中华绒螯蟹NPM1P9、NAP1L1在精子发生过程中的定位
        4.3.4 中华绒螯蟹组蛋白H1与NPM1P9间的体内相互作用
        4.3.5 中华绒螯蟹NPM1P9蛋白的表达
    4.4 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]精子形成中的表观遗传调控[J]. 康俊炎,苟兰涛,刘默芳.  生命科学. 2017(10)
[2]锯缘青蟹精子碱性蛋白分布与受精[J]. 康现江,李少菁,王桂忠,项有茂.  动物学报. 2001(S1)
[3]真虾部动物精子结构研究进展[J]. 姜叶琴,韩志萍.  湖州师范学院学报. 2001(03)
[4]十足目甲壳动物精子发生过程顶体形成和细胞核变化[J]. 康现江,王所安.  动物学杂志. 2000(04)
[5]蟹类精子超微结构的比较研究[J]. 堵南山,赖伟,陈立侨,薛鲁征,李太武,王兰.  动物学研究. 1999(05)
[6]甲壳动物精子学研究概况Ⅱ.精子发生与精子的生化组成[J]. 王艺磊,张子平,李少菁.  动物学杂志. 1998(04)
[7]长江华溪蟹精子超微结构的研究[J]. 刘芳,谈奇坤.  动物学杂志. 1997(01)
[8]三种对虾雄性生殖系统解剖学、组织学与组织化学的研究[J]. 张子平，王艺磊.  厦门水产学院学报. 1996(02)
[9]锯缘青蟹精子超微结构的研究[J]. 上官步敏,李少菁.  动物学报. 1994(01)
[10]中华绒螯蟹精子的研究——Ⅰ.精子的形态及超微结构[J]. 堵南山,赖伟,薛鲁征.  海洋与湖沼. 1987(02)

博士论文
[1]中华绒螯蟹精子核非浓缩的表观遗传机制[D]. 李根亮.河北大学 2011

硕士论文
[1]组蛋白变体macroH2A分子伴侣的筛选[D]. 林娜.北京协和医学院 2016
[2]组蛋白变体对河蟹精子非浓缩核的影响[D]. 张才达.河北大学 2016
[3]中华绒螯蟹组蛋白H1基因的克隆及其在精巢发育中的表达特征[D]. 钱陪陪.河北大学 2015
[4]中华绒螯蟹（Eriochier sinensis）血细胞组成、功能及体外培养的研究[D]. 洪宇航.上海海洋大学 2013



本文编号：3727897