尼罗罗非鱼PKCθ蛋白和Spartin蛋白的原核表达、抗体制备及其组织表达

发布时间：2023-02-06 16:46

　　为了研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)蛋白激酶C theta(PKCθ)和Spartin的蛋白表达情况,本实验在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达和提纯了尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin的重组蛋白,并利用日本大耳兔(Oryctolagus cuniculus)制备了相应的多克隆抗体。用间接ELISA技术检测抗体效价,Western Blot鉴定抗体的特异性,并检测其在罗非鱼肝、脾、肠和肌肉组织中的表达情况。结果表明,实验成功构建了原核表达载体p ET-B2m-PKCθ和pET-B2m-Spartin,实现了重组蛋白的原核表达和纯化。PKCθ重组蛋白主要存在于包涵体中,分子量约为56 ku;Spartin重组蛋白分子量约为30 ku,以包涵体蛋白的形式存在。获得的多克隆抗体效价均高达1︰512 000,Western Blot检测结果表明,制备的抗体能特异性识别尼罗罗非鱼PKCθ和Spartin多种异构体;PKCθ蛋白在罗非鱼肝、脾、肠与肌肉组织中均有表达;Spartin蛋白在罗非鱼的肝、脾和肠组织中不表达,在肌肉组织中表达。研究表明,尼罗罗非...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 PKCθ和Spartin基因扩增及原核表达质粒构建
    1.2 重组蛋白的表达和纯化
    1.3 蛋白结构分析和抗原预测
    1.4 多克隆抗体制备和效价检测
    1.5 抗体特异性的Western Blot分析
    1.6 抗体纯化
2 结果
    2.1 原核表达质粒的构建与鉴定结果
    2.2 重组蛋白的表达与纯化
    2.3 跨膜区和抗原性分析
    2.4 多克隆抗体的效价检测
    2.5 抗体特异性检测结果
    2.6 抗体纯化结果
3 讨论



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