中华乌塘鳢（Bostrychus sinensis）Toll样受体信号通路5个功能基因的分子克隆及表达研究

发布时间：2023-03-06 19:47

　　中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis)是我国福建、广东、广西等地区重要的海水经济鱼类,随着集约式养殖的密度增大,中华乌塘鳢养殖场病害频发,中华乌塘鳢养殖业也因此遭受了巨大的经济损失。鱼类抵御微生物病原体的第一道有效防线是先天免疫系统,它可以通过一系列的模式识别受体(PRR)特异性的识别微生物病原体一系列不同的特征分子“病原体相关分子模式”(PAMPs),并诱导炎症细胞因子和I型干扰素等的释放,应对微生物病原体的攻击。Toll样受体(TLR)是一类至关重要的PRR,属于Ⅰ型跨膜受体。为深入了解中华乌塘鳢的免疫系统以及TLR信号通路的作用机制,本研究克隆了中华乌塘鳢TLR信号通路中的五个重要基因:TLR1(BsTLR1)、TLR2(BsTLR2)、TLR5(BsTLR5)、MyD88(BsMyD88)及TIRAP(BsTIRAP),并对这些基因进行了生物信息学的分析。为进一步了解这些基因在先天免疫中的作用,通过实时荧光定量技术分析了其在健康鱼体组织中的表达模式,以及在副溶血弧菌和Poly I:C刺激后的表达模式。具体研究结果如下:(1)BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5...

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 TLRs研究进展综述
        1.1.1 Toll样受体的发现
        1.1.2 Toll样受体的分类
        1.1.3 TLRs介导的免疫信号通路
    1.2 中华乌塘鳢简介
    1.3 研究目的及意义
第二章 TLR信号通路五个功能基因的克隆及序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验用鱼
        2.1.2 实验器材
        2.1.3 主要试剂与溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验动物组织获取
        2.2.2 总RNA提取
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 五个基因的全长克隆
        2.2.5 五个基因的生物信息学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 TLR信号通路五个功能基因的序列特征
        2.3.2 同源性分析
        2.3.3 进化关系分析
        2.3.4 蛋白结构域比较
        2.3.5 不同脊椎动物TLR信号通路五个功能基因的序列比对
    2.4 讨论
第三章 健康鱼体五个功能基因的组织表达模式
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 健康鱼体各组织c DNA定量模板的获取
        3.2.2 实时荧光定量PCR
    3.3 实验结果
    3.4 讨论
第四章 副溶血弧菌和Poly I:C刺激下五个基因的组织表达模式
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验用鱼及细菌
        4.1.2 实验仪器和试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 细菌培养
        4.2.2 细菌及Poly I:C悬液制备
        4.2.3 细菌及Poly I:C刺激实验
        4.2.4 总RNA提取及模板制备
        4.2.5 实时荧光定量反应
    4.3 实验结果
        4.3.1 Bs TLR1 在外源物刺激后的差异表达
        4.3.2 Bs TLR2 在外源物刺激后的差异表达
        4.3.3 Bs TLR5 在外源物刺激后的差异表达
        4.3.4 Bs My D88 在外源物刺激后的差异表达
        4.3.5 Bs TIRAP在外源物刺激后的差异表达
    4.4 讨论
结论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果



本文编号：3757271