南京地区异育银鲫出血性败血症病原的鉴定

发布时间：2023-03-07 10:31

　　近年来,鲤疮疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV2)感染的流行对我国异育银鲫的养殖造成了严重的经济损失。该病原在中国大陆部分省市地区引起的疫情已受到越来越多的关注,特别是在江苏省主要水产养殖地区。此外,其它细菌性病原,特别是嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)也引起鲫鱼的出血性败血症。2015年,南京地区的部分异育银鲫饲养塘口相继出现了出血性败血症疫情。本试验采集病料42份,首先分离纯化细菌,基于气单胞菌DNA促旋酶B亚单位(gyrB)基因序列设计引物,PCR扩增后测序,进行细菌性病原的检测;同时,提取各病料样本基因组,PCR扩增CyHV2解旋酶(hel)基因,进行病毒性病原的鉴定。结果表明,28份检测样本有气单胞菌感染,其中6份为维氏气单胞菌(A.veronii),11份为简达气单胞菌(A.jandaei),3份为温和气单胞菌(A.sobria),8份为嗜水气单胞菌(A.hydrophila)。在42份病料中,34份为CyHV2阳性,其中在30份病死鲫鱼样本中,26份为CyHV2阳性;在12份临床健康鱼样本中,8份为CyHV2阳性,阳...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 鲤疱疹病毒2型的研究进展
        1 病原学
            1.1 病毒分类地位
            1.2 病毒基因组结构
            1.3 病毒的分离培养
        2 流行病学
            2.1 病原分布
            2.2 宿主与传播途径
            2.3 临床症状与组织病变
        3 鲤疙疹病毒2型感染的免疫学研究
            3.1 灭活疫苗
            3.2 亚单位疫苗
            3.3 鲤鱼抗CyHV2感染的免疫应答基因
        4 小结
        参考文献
第二篇 试验研究
    第二章 南京地区异育银鲫出血性败血症病原的检测
        1 材料
            1.1 病鱼
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 病史调查
            2.2 水质监测
            2.3 分子生物学检测
            2.4 斑马鱼致病性实验
            2.5 多位点序列分型
        3 结果
            3.1 病史调查
            3.2 水质检测
            3.3 临床症状
            3.4 分子生物学检测
            3.5 斑马鱼致病性试验
            3.7 多位点序列分型
        4 讨论
        参考文献
    第三章 CYHV2病原纯化及ORF30基因的克隆表达
        1 材料
            1.1 病料、载体、菌株
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 实验动物
        2 方法
            2.1 病料处理
            2.2 差速离心
            2.3 蔗糖浓度梯度离心
            2.4 病毒粒子的电镜观察
            2.5 ORF30基因的引物设计与合成
            2.6 病毒核酸的提取
            2.7     ORF30基因的扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
            2.8 PCR产物的回收
            2.9 目的基因与pET32a的连接与转化
            2.10 重组质粒pET32a-ORF30克隆菌的筛选与鉴定
            2.11 重组质粒pET32a-ORF30诱导条件的优化
            2.12 SDS-PAGE鉴定
            2.13 pET32a-ORF30融合蛋白的大量表达
            2.14 上清蛋白的纯化
            2.15 实验动物的免疫接种
            2.16 采血、分离血清及多克隆抗体效价的测定
            2.17 Western blot鉴定
        3 结果
            3.1 病毒纯化
            3.2 ORF30基因的PCR扩增
            3.3 ORF30基因克隆质粒的鉴定
            3.4 重组质粒pET32a-ORF30诱导条件的优化
            3.5 重组质粒大量表达的上清蛋白纯化
            3.6 多克隆抗体效价的测定
            3.7 Western blot鉴定
        4 讨论
        参考文献
全文总结
致谢



本文编号：3757433