刺激隐核虫感染养殖大黄鱼的LAMP检测与分析

发布时间：2023-03-18 18:42

　　近年来，随着大黄鱼养殖规模日益扩张，网箱养殖大黄鱼的病害频发，其中大黄鱼“白点病”成为危害最为严重的流行性疾病之一。“白点病”病原为刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)，病鱼大量感染该寄生虫后，会出现体表、鳍条及鳃瓣布满肉眼可见的大小白色点状虫体和包囊，活动异常、上皮增生、呼吸困难、机械损伤等病症。本文利用分子生物学技术，构建并完善了LAMP检测方法；采用该方法对养殖大黄鱼海区、鱼体组织等感染刺激隐核虫跟踪检测，阐述了2012²013年期间，刺激隐核虫感染养殖大黄鱼的规律；研究了温度、盐度等海区水体理化因子对刺激隐核虫感染的影响；分析了刺激隐核虫对不同鱼体组织的感染差异；为大黄鱼刺激隐核虫病的防控技术研究以及实行刺激隐核虫病原的检测、监测等提供了理论基础和实验依据。 本文依赖自动循环链置换反应，通过识别靶序列上4个特异区域的引物和具有链置换的DNA聚合酶，在Mg2+浓度为2mmol-1、反应温度61℃⁶6°C，内外引物浓度2:1⁶:1、反应时间60min的优化条件下，扩增出呈特异性LAMP梯形条带产物...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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论文摘要
Abstract of Thesis
引言
1.绪论
    1.1 大黄鱼的生物学特性及养殖现状
        1.1.1 形态特征
        1.1.2 种群分布
        1.1.3 生物学特征
        1.1.4 繁殖规律
        1.1.5 养殖现状
    1.2 大黄鱼病害研究概况
        1.2.1 网箱养殖大黄鱼的主要疾病及其病原
        1.2.2 大黄鱼疾病的病原检测及其防治
    1.3 海水鱼类刺激隐核虫及其研究进展
        1.3.1 刺激隐核虫的基本特征
        1.3.2 刺激隐核虫的发现以及分类学地位的确定
        1.3.3 刺激隐核虫的生活史
        1.3.4 刺激隐核虫病的病理症状及诊断
        1.3.5 刺激隐核虫病流行情况及病因分析
        1.3.6 刺激隐核虫病防治方法
    1.4 鱼类寄生虫病的检测与诊断方法
    1.5 LAMP 检测技术的研究与应用
    1.6 论文研究的内容及目的
2.大黄鱼刺激隐核虫 LAMP 检测方法的建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 虫株与菌株
        2.1.2 主要试剂及仪器
        2.1.3 大黄鱼刺激隐核虫的 LAMP 反应体系的建立
        2.1.4 反应体系及条件的优化
            2.1.4.1 时间、温度的优化
            2.1.4.2 反应体系组成的优化
        2.1.5 反应特异性检验
        2.1.6 LAMP 反应灵敏度检验
    2.2 结果与分析
        2.2.1 建立大黄鱼刺激隐核虫病 LAMP 检测方法
        2.2.2 时间、温度的优化
        2.2.3 反应体系组成的优化
        2.2.4 反应特异性检验
        2.2.5 LAMP 反应灵敏度检验
    2.3 讨论
3 刺激隐核虫感染养殖大黄鱼的检测与分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 样品来源
        3.1.4 鱼组织总 DNA 和病原生物基因组 DNA 的提取
        3.1.5 样品检测
        3.1.6 水体理化因子的检测
        3.1.7 数据处理
    3.2 结果与分析
        3.2.1 水温、盐度对大黄鱼刺激隐核虫感染的影响
        3.2.2 刺激隐核虫感染大黄鱼不同组织的差异
        3.2.3 养殖海区水体中刺激隐核虫的周年监测与分析
        3.2.4 大黄鱼养殖海区水体理化因子检测与分析
    3.3 讨论
4 本研究的主要结论
    4.1 建立、优化大黄鱼刺激隐核虫病的 LAMP 检测技术
    4.2 刺激隐核虫感染大黄鱼的周年监测
参考文献
在学研究成果
致谢



本文编号：3763665