鲤NaPi-Ⅱb基因克隆及其在组织和胚胎发育过程中表达研究

发布时间：2023-03-27 05:05

　　磷是维持动物体内各项生理活动正常进行的必需矿质元素之一,水产饲料中磷的大量添加和低利用率会造成磷资源浪费以及水体环境的恶化。从分子水平上了解水产动物对磷代谢的机理,可以避免鱼类因为磷缺乏而导致的疾病的同时又能控制水体环境,防止水体富营养化。已知NaPi-Ⅱ型蛋白协调动物体内磷元素的动态平衡,肠道和肾脏通过NaPi-II型蛋白完成磷的吸收,故对NaPi-II型蛋白基因在分子生物学上的研究对水产养殖行业有指导意义。 本研究根据Genbank已知鲤科鱼类斑马鱼(Danio rerio)的NaPi-IIb基因序列设计引物,采用RT-PCR方法和RACE技术克隆出鲤(Cyprinus carpio)的NaPi-IIb基因cDNA全序列,所得序列经过拼接后进行序列的分析。利用Real-time PCR技术研究了鲤胚胎发育过程中和鲤不同组织中NaPi-Ⅱb mRNA表达量差异。实验结果如下： (1)获得鲤NaPi-IIb基因2594bp的完整cDNA序列,包括1491bp的完全CDS区,编码496个氨基酸,完全5’-UTR (448bp)和3’-UTR (655bp)和一个polyA尾巴。所得序列已...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 磷的来源与特点
    1.2 磷的吸收方式与转运机理
    1.3 钠磷转运载体蛋白的种类及组织分布
    1.4 NaPi-Ⅱ型转运载体蛋白的结构
    1.5 影响NaPi-Ⅱb蛋白对磷转运的因素
        1.5.1 日粮磷含量
        1.5.2 钙磷含量与钙磷比
        1.5.3 维生素D
        1.5.4 pH值
        1.5.5 激素
        1.5.6 日龄
    1.6 研究磷吸收转运的技术与方法
    1.7 水产动物NaPi-Ⅱb蛋白的研究进展
    1.8 本实验的研究内容以及目的与意义
        1.8.1 论文研究内容
        1.8.2 研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 样本采集
    2.2 实验仪器与试剂
        2.2.1 主要仪器设备
        2.2.2 主要药品和试剂
        2.2.3 试剂盒及工具酶
        2.2.4 运用的生物学软件
    2.3 实验方法
        2.3.1 鲤组织RNA的提取与检测
        2.3.2 鲤NaPi-Ⅱb基因的克隆
        2.3.3 鲤不同组织NaPi-Ⅱb基因mRNA的含量表达
        2.3.4 数据统计与分析
3 结果与分析
    3.1 组织总RNA提取结果
    3.2 鲤NaPi-Ⅱb基因的克隆与测序
        3.2.1 鲤NaPi-Ⅱb基因的cDNA克隆
        3.2.2 鲤NaPi-Ⅱb基因序列的分析
        3.2.3 NaPi-Ⅱb基因编码蛋白质的一级结构分析
        3.2.4 NaPi-Ⅱb基因编码蛋白质的二级结构分析
        3.2.5 NaPi-Ⅱb基因编码蛋白质的结构域及功能基序的分析
        3.2.6 鲤NaPi-Ⅱb基因的系统进化树及亲缘关系分析
    3.3 鲤NaPi-Ⅱb基因在各组织中的Real-Time PCR检测
        3.3.1 鲤鱼卵中NaPi-Ⅱb基因的表达分析
        3.3.2 鲤各个组织中NaPi-Ⅱb基因的表达分析
4 讨论
    4.1 鲤NaPi-Ⅱb基因的克隆、序列分析
        4.1.1 鲤NaPi-Ⅱb基因的克隆
        4.1.2 鲤NaPi-Ⅱb基因的同源性及进化分析
    4.2 鲤NaPi-Ⅱb基因在组织中的表达差异
        4.2.1 鲤NaPi-Ⅱb基因在胚胎不同发育时期的表达差异
        4.2.2 鲤NaPi-Ⅱb基因在组织中的表达差异
    4.3 研究展望
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3772448