多倍体鱼IKKε基因功能的初步研究

发布时间：2023-05-09 19:54

　　天然免疫又被称之为非特异性免疫,指个体与生具有的、作用范围广、不针对特定抗原的免疫能力。天然免疫是一种包含大量模式识别受体(PRR)的高度复杂的快速诱导免疫反应,这些模式识别受体识别各种病原体相关分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs),并通过各个不同的信号通路激活机体的免疫应答。 IKKε(inhibitor of NF-kB kinase ε)是天然免疫系统中Toll-Like信号通路以及NF-kB (nuclear factor-kappa B)信号通路中的一种激酶,它是最新发现的IκB激酶家族(IkB kinase,IKKs)的成员,最初被认定为脂多糖诱导的丝氨酸/苏氨酸激酶。IKKε在信号分子的作用下磷酸化IkBα来诱导激活NF-kB,或者与TBK1(TANK-binding kinase1)在支架蛋白的作用下磷酸化IRF3(interferon regulatory factor3)与IRF7(interferon regulatory factor7)激酶,从而诱导IFN的分泌。 天然免疫是鱼类等低等脊椎动物的防...

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中文摘要
ABSTRACT
目录
第一章 前言
    1.1 鱼类免疫研究
    1.2 IKKε与天然免疫
        1.2.1 NF-κB与IκB
        1.2.2 IKKε的研究进展
    1.3 青鱼、草鱼及多倍体鱼
        1.3.1 青鱼和草鱼
        1.3.2 多倍体
第二章 青鱼草鱼以及多倍体鱼IKKε基因的克隆
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 仪器与试剂
    2.2 青鱼IKKε基因cDNA编码阅读框的克隆
        2.2.1 青鱼脾脏以及多倍体鱼细胞RNA的提取—Trizol法
        2.2.2 cDNA第一条链的合成
        2.2.3 引物设计及合成
        2.2.4 PCR扩增
        2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测
        2.2.6 PCR产物的回收
        2.2.7 PCR回收产物平滑末端加A尾
        2.2.8 连接反应
        2.2.9 采用热激法转化大肠杆菌TOP10感受态细胞
        2.2.10 阳性克隆的筛选
        2.2.11 测序鉴定
    2.3 青鱼IKKE基因cDNA全长的扩增
        2.3.1 多倍体鱼细胞以及青鱼草鱼脾脏RNA的提取—Trizol法
        2.3.2 多倍体鱼细胞以及青鱼脾脏cDNA的制备
        2.3.3 5’RACE的PCR扩增
        2.3.4 3’RACE的PCR扩增
    2.4 实验结果
        2.4.1 总RNA提取结果
        2.4.2 青鱼草鱼IKKε基因cDNA序列信息
        2.4.3 青鱼草鱼IKKε基因的进化树分析
    2.5 讨论
第三章 青鱼IKKε基因的表达
    3.1 材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 仪器,试剂与配置
    3.2 方法
        3.2.1 免疫印记检测(western blotting)
        3.2.2 免疫共聚焦(confocal)
        3.2.3 青鱼IKKε基因开放阅读框的克隆
        3.2.4 构建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk与pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表达载体
        3.2.5 青鱼IKKε基因在HEK293T细胞中的表达
        3.2.6 青鱼IKKε基因构建慢病毒载体
    3.3 实验结果
        3.3.1 构建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk与pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表达载体
        3.3.2 青鱼IKKε基因在HEK293T细胞中的表达
        3.3.3 青鱼IKKε基因的免疫荧光
        3.3.4 构建青鱼IKKε基因的慢病毒载体
    3.4 讨论
参考文献
附录
致谢



本文编号：3812292