17α-乙炔基雌二醇对稀有鮈鲫性别特异性基因表达的影响

发布时间：2023-08-30 05:01

　　17α-乙炔基雌二醇（EE2）是内分泌干扰物中一种具有强雌激素效应的人工合成化合物，能对动物体内基因尤其是性别特异性基因的表达产生显著影响。稀有鮈鲫对外源性激素很敏感，是研究EDCs理想的试验动物。 由生殖系a因子（figla）、叉头状转录因子2（foxl2）、联会复合体蛋白3（scp3）、Sry相关的高迁移率族蛋白9a（sox9a）、卵黄蛋白原（vtg）、透明体蛋白2（zp2）和透明体蛋白3（zp3）等基因编码的蛋白质在性腺分化或繁殖中充当重要的角色。在本研究中，首先通过常规PCR和RACE方法克隆获得稀有鮈鲫figla、scp3、sox9a和zp3四个基因的cDNA全长序列，并采用实时定量PCR方法检测它们在稀有鮈鲫成鱼中的组织分布情况。然后用浓度为1、5、25和125ng/L的EE2暴露稀有鮈鲫3天和6天后，实时定量PCR方法检测性腺中figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2和zp3以及肝脏中vtg、zp2和zp3表达量变化，旨在探究这些基因对EE2的响应能力以及寻找对EE2早期预警的敏感生物标志物。最后通过染色体步移方式克隆获得figla、foxl2、sox...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 前言
    1.2 内分泌干扰物
        1.2.1 EDCs 概述
        1.2.2 EDCs 的毒害作用
    1.3 EDCs 的分子标志物
        1.3.1 figla
        1.3.2 foxl2
        1.3.3 scp3
        1.3.4 sox9
        1.3.5 vtg
        1.3.6 zp
    1.4 生态毒理试验用鱼
    1.5 本研究目的和意义
第二章 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全长的克隆与组织分布
    2.1 前言
    2.2 材料与试剂
        2.2.1 主要试验器材
        2.2.2 主要试验试剂
        2.2.3 试验用溶液及配制
        2.2.4 试验材料
    2.3 试验方法
        2.3.1 figla、scp3、sox9a 和 zp3 中间片段的克隆
        2.3.2 RACE 方法克隆 cDNA 末端序列
        2.3.3 测序结果整理及分析
        2.3.4 qRT-PCR
        2.3.5 数据处理及分析
    2.4 结果分析
        2.4.1 总 RNA 质量
        2.4.2 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全长的克隆
        2.4.3 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全长的分析
        2.4.4 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因的组织分布
    2.5 讨论
        2.5.1 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因结构与功能
        2.5.2 稀有鮈鲫 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因的组织分布与功能
    2.6 小结
第三章 EE2 对稀有鮈鲫 figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2 和 zp3 基因表达的影响
    3.1 前言
    3.2 材料与试剂
        3.2.1 主要试验器材
        3.2.2 主要试验试剂
        3.2.3 试验材料
        3.2.4 暴露试验
    3.3 试验方法
        3.3.1 总 RNA 提取
        3.3.2 RNA 质量和浓度检测
        3.3.3 cDNA 第一链合成
        3.3.4 qRT-PCR
        3.3.5 内参基因筛选
        3.3.6 5′侧翼序列的克隆
        3.3.7 数据处理及分析
    3.4 结果分析
        3.4.1 内参基因筛选
        3.4.2 EE2 对 figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2 和 zp3 基因表达影响
        3.4.3 5′侧翼序列分析
    3.5 讨论
        3.5.1 EE2 对稀有鮈鲫 figla 基因表达的影响
        3.5.2 EE2 对稀有鮈鲫 foxl2 基因表达的影响
        3.5.3 EE2 对稀有鮈鲫 scp3 基因表达的影响
        3.5.4 EE2 对稀有鮈鲫 sox9a 基因表达的影响
        3.5.5 zp 和 vtg 基因对 EE2 不同的响应能力
        3.5.6 性腺中 zp2 和 zp3 对 EE2 不同的响应能力
    3.6 小结
结论、创新点和下一步研究计划
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介



本文编号：3844933