真鲷（Pagrus major）和大菱鲆（Scophthalmus maximus）精子介导转基因的初步研究

发布时间：2023-10-06 17:07

　　转基因技术是改良生物性状的重要手段，其主要方法包括显微注射、精子 介导法、电穿孔等。显微注射在鱼类的应用中存在一些技术难题，一直未有突破性的进展。精子介导法转基因（Sperm-mediated gene transfer，SMGT）操作简便、成本低，同时避开了鱼类受精卵各种特性的限制，在转基因鱼的制备中具有优势。目前鱼类SMGT技术应用仍处于初步阶段，存在不稳定，重复性差等问题，不同鱼种需要针对性地研究具体的精子介导方式和处理条件。真鲷（Pagrus major）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）是我国重要的海水养殖经济品种，本论文以这两种海水鱼为材料，研究分析外源DNA对其精子生理特性的影响及其转染效果，进一步实验探讨这两种海水鱼类SMGT技术的可行性和改进方法，主要结果如下： 1）外源DNA对真鲷精子活力的影响并不显著，仅在质粒pPmvasGFP达到2μg/106个精子的高浓度时，精子的运动速度稍有下降，5μg/106个精子的pPmvasGFP质粒孵育精子12h后，平均直线速度（VSL）相较于对照组低22.0%，但平均曲线速度（VCL）和精子活率（MOT）和并未减...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 SMGT 技术概述
        1.1.1 SMGT 技术的起源与发展
        1.1.2 SMGT 技术的改进
        1.1.3 SMGT 技术的机理研究
    1.2 SMGT 技术在鱼类的研究进展
        1.2.1 研究成果和现状
        1.2.2 海水鱼类 SMGT
        1.2.3 鱼类 SMGT 的影响因素
    1.3 本研究的目的及意义
第二章 真鲷精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    2.1 研究背景
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 试剂和仪器
        2.2.3 质粒提取和 DNA 片段合成
        2.2.4 精子解冻和精浆去除
        2.2.5 外源 DNA 孵育真鲷精子与检测观察
        2.2.6 真鲷人工授精实验和仔鱼检测
        2.2.7 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 外源 DNA 对真鲷精子活力的影响
        2.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后荧光观察
        2.3.3 PCR 检测
        2.3.4 真鲷 SMGT 实验和子代检测
    2.4 讨论
第三章 大菱鲆精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    3.1 研究背景
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 试剂和仪器
        3.2.3 质粒的提取和 DNA 片段合成
        3.2.4 精子解冻和精浆去除
        3.2.5 外源 DNA 孵育大菱鲆精子与检测观察
        3.2.6 大菱鲆人工授精实验和仔鱼检测
        3.2.7 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 外源 DNA 对大菱鲆精子活力的影响
        3.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后荧光观察
        3.3.3 PCR 检测
        3.3.4 大菱鲆人工授精实验和子代检测
    3.4 讨论
第四章 转基因相关工作——大菱鲆 vasa 基因转录调控序列获得及表达载体构建
    4.1 研究背景
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 试剂与仪器
        4.2.3 大菱鲆 vasa 基因转录调控序列克隆
        4.2.4 大菱鲆 vasa 基因 5’调控序列分析
        4.2.5 pSMvasGFP 转基因表达载体构建
    4.3 实验结果
        4.3.1 大菱鲆 vasa 基因 5’和 3’侧翼序列克隆
        4.3.2 大菱鲆 vasa 基因 5’调控序列的生物信息学分析
        4.3.3 pSMvasGFP 表达载体构建
    4.4 讨论
参考文献
作者简介
文章撰写和发表情况



本文编号：3852111