对虾白斑综合征病毒和黄头病毒等温扩增检测方法的建立及应用
发布时间：2023-10-11 21:07
近年来，水产业迅猛发展，已逐渐成为中国农业中发展较快的产业之一，在全球水产总量中占有举足轻重的地位。但在我国水产养殖规模不断壮大的同时，各种病害也随之而来。对虾养殖业作为我国海水养殖业的支柱产业之一，也深受多种病害困扰，我国对虾养殖业每年因对虾病害流行造成的损失高达数十亿元。利用灵敏、高效的病原检测技术加强对虾苗种或养殖期特定病原的定期检测被认为是防控对虾病害流行的有效手段。等温扩增技术作为一种新兴的检测手段，已经广泛应用于人类医学、动物卫生等相关病原检测中。为了加强两种重要对虾病害——对虾白斑病（White spot disease，WSD）和黄头病（Yellow head disease，YHD）的防控，本研究分别建立了对虾白斑综合征病毒（White spot syndromevirus，WSSV）、黄头病毒（Yellow head virus，YHV）的快速、高灵敏等温扩增检测技术。 本研究根据对虾WSSV基因组的保守序列设计合成5条特异性引物，通过对反应体系中的Mg2+、dNTPs等试剂组分和温度、时间等反应条件进行优化，建立了WSSV的交叉引物等温扩增（cross primi...
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 分子生物学方法在水产养殖动物病原检测中的应用
1.1.1 等温扩增技术
1.1.2 聚合酶链反应技术（Polymerase chain reaction, PCR）
1.1.3 限制性酶切技术
1.2 几种水产养殖动物病原概述
1.2.1 对虾白斑综合征病毒（WSSV）
1.2.2 黄头病毒（YHV）
第二章 对虾白斑综合征病毒交叉引物等温扩增检测方法的建立及应用
2.1 实验材料与方法
2.1.1 病料来源
2.1.2 DNA 模板的提取及 WSSV 阳性模板的确定
2.1.3 WSSV-CPA 引物设计
2.1.4 WSSV-CPA 反应条件
2.1.5 WSSV-CPA 反应体系及反应条件的优化
2.1.6 WSSV-CPA 的特异性
2.1.7 WSSV-CPA 产物酶切鉴定
2.1.8 WSSV 的 CPA 与套式 PCR 检测方法的灵敏度比较
2.1.9 WSSV 的 CPA 与 TagMan 探针法 qPC 方法的灵敏度比较
2.1.10 WSSV 的 CPA 与 LAMP 方法的灵敏度比较
2.1.11 WSSV qCPA 检测方法的建立
2.1.12 利用 WSSV-CPA 进行实际样品检测
2.2 实验结果
2.2.1 WSSV-CPA 反应的优化结果
2.2.2 WSSV-CPA 方法的特异性结果
2.2.3 WSSV-CPA 产物的酶切鉴定结果
2.2.4 WSSV-CPA 与 WSSV 套式 PCR 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.5 WSSV-CPA 与 WSSV-qPCR 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.6 WSSV-CPA 与 WSSV-LAMP 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.7 WSSV qCPA 检测方法的建立
2.2.8 利用 WSSV-CPA 检测对虾组织样品结果
2.3 讨论
第三章 黄头病毒中国株 rRT-LAMP 检测方法的建立
3.1 实验材料与方法
3.1.1 病料来源
3.1.2 RNA 模板的提取
3.1.3 引物设计
3.1.4 rRT- LAMP 反应条件
3.1.5 rRT- LAMP 反应体系和反应条件的优化
3.1.6 rRT- LAMP 产物酶切鉴定
3.1.7 RNA 标准品的制备及标准曲线的建立
3.1.8 rRT-LAMP 灵敏度分析及与 rRT-PCR 的比较
3.1.9 rRT-LAMP 灵敏度分析及与 RT-LAMP 试剂盒的比较
3.1.10 rRT-LAMP 的特异性检验
3.1.11 rRT-LAMP 实际样品检测
3.2 实验结果
3.2.1 rRT-LAMP 反应体系的优化结果
3.2.2 rRT-LAMP 产物的酶切鉴定结果
3.2.3 标准曲线的建立
3.2.4 YHV rRT-LAMP灵敏度检测分析及与rRT-PCR的比较结果
3.2.5 rRT-LAMP灵敏度分析及与RT-LAMP试剂盒的比较
3.2.6 特异性检测结果
3.2.7 实际样品检测结果
3.3 讨论
第四章 对虾白斑综合征病毒与黄头病毒中国株的分子流行病学分析
4.1 材料与方法
4.1.1 对虾样品的来源
4.1.2 样品处理
4.2 WSSV 和 YHV 流行病学初步分析
4.2.1 对虾种类与病毒阳性比率
4.2.2 地理位置与病毒阳性比率
4.2.3 两种病毒阳性检出比率
4.3 讨论
参考文献
致谢
本文编号：3852792
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 分子生物学方法在水产养殖动物病原检测中的应用
1.1.1 等温扩增技术
1.1.2 聚合酶链反应技术（Polymerase chain reaction, PCR）
1.1.3 限制性酶切技术
1.2 几种水产养殖动物病原概述
1.2.1 对虾白斑综合征病毒（WSSV）
1.2.2 黄头病毒（YHV）
第二章 对虾白斑综合征病毒交叉引物等温扩增检测方法的建立及应用
2.1 实验材料与方法
2.1.1 病料来源
2.1.2 DNA 模板的提取及 WSSV 阳性模板的确定
2.1.3 WSSV-CPA 引物设计
2.1.4 WSSV-CPA 反应条件
2.1.5 WSSV-CPA 反应体系及反应条件的优化
2.1.6 WSSV-CPA 的特异性
2.1.7 WSSV-CPA 产物酶切鉴定
2.1.8 WSSV 的 CPA 与套式 PCR 检测方法的灵敏度比较
2.1.9 WSSV 的 CPA 与 TagMan 探针法 qPC 方法的灵敏度比较
2.1.10 WSSV 的 CPA 与 LAMP 方法的灵敏度比较
2.1.11 WSSV qCPA 检测方法的建立
2.1.12 利用 WSSV-CPA 进行实际样品检测
2.2 实验结果
2.2.1 WSSV-CPA 反应的优化结果
2.2.2 WSSV-CPA 方法的特异性结果
2.2.3 WSSV-CPA 产物的酶切鉴定结果
2.2.4 WSSV-CPA 与 WSSV 套式 PCR 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.5 WSSV-CPA 与 WSSV-qPCR 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.6 WSSV-CPA 与 WSSV-LAMP 检测方法的灵敏度比较结果
2.2.7 WSSV qCPA 检测方法的建立
2.2.8 利用 WSSV-CPA 检测对虾组织样品结果
2.3 讨论
第三章 黄头病毒中国株 rRT-LAMP 检测方法的建立
3.1 实验材料与方法
3.1.1 病料来源
3.1.2 RNA 模板的提取
3.1.3 引物设计
3.1.4 rRT- LAMP 反应条件
3.1.5 rRT- LAMP 反应体系和反应条件的优化
3.1.6 rRT- LAMP 产物酶切鉴定
3.1.7 RNA 标准品的制备及标准曲线的建立
3.1.8 rRT-LAMP 灵敏度分析及与 rRT-PCR 的比较
3.1.9 rRT-LAMP 灵敏度分析及与 RT-LAMP 试剂盒的比较
3.1.10 rRT-LAMP 的特异性检验
3.1.11 rRT-LAMP 实际样品检测
3.2 实验结果
3.2.1 rRT-LAMP 反应体系的优化结果
3.2.2 rRT-LAMP 产物的酶切鉴定结果
3.2.3 标准曲线的建立
3.2.4 YHV rRT-LAMP灵敏度检测分析及与rRT-PCR的比较结果
3.2.5 rRT-LAMP灵敏度分析及与RT-LAMP试剂盒的比较
3.2.6 特异性检测结果
3.2.7 实际样品检测结果
3.3 讨论
第四章 对虾白斑综合征病毒与黄头病毒中国株的分子流行病学分析
4.1 材料与方法
4.1.1 对虾样品的来源
4.1.2 样品处理
4.2 WSSV 和 YHV 流行病学初步分析
4.2.1 对虾种类与病毒阳性比率
4.2.2 地理位置与病毒阳性比率
4.2.3 两种病毒阳性检出比率
4.3 讨论
参考文献
致谢
本文编号：3852792
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