蛋白激酶AMPK在团头鲂脂肪肝发生中的作用及羟基酪醇对脂肪代谢的调控
发布时间：2023-10-19 19:47
近年来,高密度、集约化水产养殖模式的推广,导致鱼类营养性脂肪肝频繁发生,已成为制约水产养殖业健康发展的重要因素。饲料营养不均衡,过饱食投喂等原因均会引起鱼类脂肪肝的发生,进而导致病鱼生长缓慢、饲料利用率降低、抗病和抗应激能力减弱等。目前,对脂肪肝的发生机制仍缺乏足够的了解,因此,探究鱼类脂肪肝的发生机制并寻求可能的防治方法具有重要意义。本试验以团头鲂为研究对象,建立原代肝细胞脂肪沉积模型,对脂肪代谢与沉积机制进行研究,并在体内外试验研究羟基酪醇对脂肪肝的缓解作用。试验内容包括四部分:(1)团头鲂肝细胞原代培养方法的建立本试验旨在建立一种稳定可靠的团头鲂肝细胞原代培养方法。首先,采用室温胰酶消化法进行肝细胞分离,并使用percoll分离液结合密度梯度离心法纯化肝细胞;细胞在含15%FBS的L-15培养基中重悬,然后台盼蓝染色法测定细胞活力及浓度;最后于恒温箱培养并定期观察;在培养24、48、72h后,分别测定上清中的AST、ALT及LDH活性;以分析细胞生长状态。结果表明,分离纯化后的肝细胞活力值达90%以上;显微镜观察发现,培养48h肝细胞紧密连接呈岛状且形态趋于稳定;上清中的AST、...
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号表
第1章 文献综述
1.1 鱼类脂肪代谢的研究现状
1.1.1 脂类的生理功能
1.1.2 脂肪的消化和吸收
1.1.3 脂肪的合成
1.1.4 脂肪的氧化分解
1.1.5 脂肪的转运
1.1.6 鱼类脂代谢的调控因子
1.2 蛋白激酶AMPK的研究进展
1.2.1 AMPK的结构及激活机制
1.2.2 AMPK与脂肪代谢
1.2.3 AMPK与细胞线粒体调控
1.2.4 AMPK的调控因子
1.3 研究目的及意义
1.4 研究内容
第2章 团头鲂肝细胞原代培养方法的建立
2.1 材料与方法
2.1.1 试验用鱼与管理
2.1.2 原代肝细胞的分离、纯化、观察培养及样品采集
2.1.3 上清液中AST、ALT及LDH的活性
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果
2.2.1 原代肝细胞活力
2.2.2 原代肝细胞的形态观察
2.2.3 上清液中AST、ALT及LDH活性
2.3 讨论
2.4 小结
第3章 团头鲂原代肝细胞脂肪沉积模型的建立
3.1 材料与方法
3.1.1 试验设计
3.1.2 CCK-8 法测定细胞活性
3.1.3 BCA法测定蛋白浓度
3.1.4 油红O染色
3.1.5 肝细胞内脂肪水平及上清AST、ALT和LDH活性测定
3.2 结果
3.2.1 油酸对原代肝细胞存活率的影响
3.2.2 油酸对团头鲂原代肝细胞内脂肪沉积的影响
3.2.3 油酸对上清AST、ALT及LDH活性的影响
3.3 讨论
3.4 小结
第4章 蛋白激酶AMPK在团头鲂肝细胞脂肪代谢中的作用
4.1 材料与方法
4.1.1 试验设计
4.1.2 总RNA提取、反转录及荧光定量PCR
4.1.3 蛋白免疫印迹
4.1.4 线粒体相关酶活测定
4.1.5 线粒体原位示踪
4.1.6 细胞内GPX和SOD活性以及ROS和 MDA含量的测定
4.2 结果
4.2.1 二甲双胍剂量筛选
4.2.2 细胞脂肪水平及上清液AST、ALT和LDH的活性
4.2.3 二甲双胍对AMPK及P-AMPK蛋白水平的影响
4.2.4 脂肪代谢相关基因的表达水平
4.2.5 肝细胞内的线粒体状态
4.2.6 肝细胞的氧化还原反应状态
4.3 讨论
4.4 小结
第5章 羟基酪醇在团头鲂肝脏脂肪代谢中的作用
5.1 材料与方法
5.1.1 试验设计
5.1.2 线粒体相关酶活测定
5.1.3 肝细胞线粒体DNA拷贝数定量
5.1.4 线粒体膜电位测定
5.2 结果
5.2.1 细胞试验
5.2.2 养殖试验
5.3 讨论
5.3.1 细胞试验
5.3.2 养殖试验
5.4 小结
全文总结
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
本文编号：3855289
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【学位级别】：硕士
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摘要
abstract
主要符号表
第1章 文献综述
1.1 鱼类脂肪代谢的研究现状
1.1.1 脂类的生理功能
1.1.2 脂肪的消化和吸收
1.1.3 脂肪的合成
1.1.4 脂肪的氧化分解
1.1.5 脂肪的转运
1.1.6 鱼类脂代谢的调控因子
1.2 蛋白激酶AMPK的研究进展
1.2.1 AMPK的结构及激活机制
1.2.2 AMPK与脂肪代谢
1.2.3 AMPK与细胞线粒体调控
1.2.4 AMPK的调控因子
1.3 研究目的及意义
1.4 研究内容
第2章 团头鲂肝细胞原代培养方法的建立
2.1 材料与方法
2.1.1 试验用鱼与管理
2.1.2 原代肝细胞的分离、纯化、观察培养及样品采集
2.1.3 上清液中AST、ALT及LDH的活性
2.1.4 数据统计与分析
2.2 结果
2.2.1 原代肝细胞活力
2.2.2 原代肝细胞的形态观察
2.2.3 上清液中AST、ALT及LDH活性
2.3 讨论
2.4 小结
第3章 团头鲂原代肝细胞脂肪沉积模型的建立
3.1 材料与方法
3.1.1 试验设计
3.1.2 CCK-8 法测定细胞活性
3.1.3 BCA法测定蛋白浓度
3.1.4 油红O染色
3.1.5 肝细胞内脂肪水平及上清AST、ALT和LDH活性测定
3.2 结果
3.2.1 油酸对原代肝细胞存活率的影响
3.2.2 油酸对团头鲂原代肝细胞内脂肪沉积的影响
3.2.3 油酸对上清AST、ALT及LDH活性的影响
3.3 讨论
3.4 小结
第4章 蛋白激酶AMPK在团头鲂肝细胞脂肪代谢中的作用
4.1 材料与方法
4.1.1 试验设计
4.1.2 总RNA提取、反转录及荧光定量PCR
4.1.3 蛋白免疫印迹
4.1.4 线粒体相关酶活测定
4.1.5 线粒体原位示踪
4.1.6 细胞内GPX和SOD活性以及ROS和 MDA含量的测定
4.2 结果
4.2.1 二甲双胍剂量筛选
4.2.2 细胞脂肪水平及上清液AST、ALT和LDH的活性
4.2.3 二甲双胍对AMPK及P-AMPK蛋白水平的影响
4.2.4 脂肪代谢相关基因的表达水平
4.2.5 肝细胞内的线粒体状态
4.2.6 肝细胞的氧化还原反应状态
4.3 讨论
4.4 小结
第5章 羟基酪醇在团头鲂肝脏脂肪代谢中的作用
5.1 材料与方法
5.1.1 试验设计
5.1.2 线粒体相关酶活测定
5.1.3 肝细胞线粒体DNA拷贝数定量
5.1.4 线粒体膜电位测定
5.2 结果
5.2.1 细胞试验
5.2.2 养殖试验
5.3 讨论
5.3.1 细胞试验
5.3.2 养殖试验
5.4 小结
全文总结
致谢
参考文献
在学期间发表的学术论文
本文编号：3855289
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