太平洋牡蛎胞外超氧化物歧化酶同源基因与蛋白质分析

发布时间：2023-10-22 11:25

　　超氧化物歧化酶(SOD)通过清除生物体内产生的超氧化物而发挥抗氧化作用,其中,胞外超氧化物歧化酶(Ec-SOD)是重要细胞外抗氧化蛋白,但存在于牡蛎血浆内的Ec-SOD同源蛋白已经证实没有SOD酶活性。在太平洋牡蛎基因组中鉴定到3个与美洲牡蛎dominin高度相似的序列片段,并通过RT-PCR克隆验证均为表达基因,将其中的Cg-dominin 2成熟多肽在大肠杆菌中重组表达获得重组蛋白。抗氧化活性测定显示,重组Cg-dominin2的总抗氧化活性相当于0.0525 mmol/g Trolox。将太平洋牡蛎以不同浓度的Cd²⁺, Zn²⁺进行胁迫刺激,定量PCR检测显示Cg-dominin2基因的相对表达量有显著上调,血浆蛋白的对应金属含量也有所增加。上述结果提示太平洋牡蛎胞外超氧化物歧化酶同源蛋白可能通过参与体内金属代谢过程从而在抵御重金属胁迫中发挥作用。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 供试材料
    1.2 序列查找与分析
    1.3 序列验证
    1.4 Cg-dominin2重组蛋白的制备和抗氧化活性测定
    1.5 金属刺激实验
    1.6 Cg-dominin2基因表达实时荧光定量 PCR 检测
    1.7 血浆沉淀蛋白中金属含量的测定
2 结果与分析
    2.1 Cg-dominin基因、转录物和氨基酸序列分析
    2.2 Cg-dominin2基因体外重组表达和活性测定
    2.3 锌和镉胁迫下的Cg-dominin2基因表达
    2.4 金属刺激后太平洋牡蛎血浆沉淀蛋白质中相应金属含量
3 讨论



本文编号：3856423