三角帆蚌基质金属蛋白酶基因的克

发布时间：2023-12-24 13:05

　　三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)是我国重要的淡水育珠蚌之一,育珠插核过程中伤口容易受到病原体侵染,使育珠蚌的吐核率升高,甚至造成蚌的死亡。因此,开展对其分子免疫及伤口修复机制的研究具有重要的理论和实际意义。本文采用RACE PCR技术分别克隆出了三角帆蚌的基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶-19(MMP-19)的cDNA序列,利用实时荧光定量PCR方法检测2种基因在健康蚌血淋巴、肝胰脏、闭壳肌、外套膜和鳃5种组织中的表达情况;以及嗜水气单胞菌和肽聚糖(PGN)刺激后,2种基因在血液和肝胰脏中的表达变化;通过建立三角帆蚌创伤修复模型,利用实时荧光定量PCR方法检测2种基因在伤口修复期间不同时间段的表达情况;利用原核表达技术对2种基因进行了原核表达。MMP1基因的cDNA全长序列为1822 bp,其中5’UTR(非编码区)有31 bp;3’UTR有258 bp;开放阅读框(ORF)的碱基长度为1533 bp,共编码510个氨基酸。经Expasy在线网站的SignalP 4.0分析氨基酸发现该蛋白含有信号肽序列,该蛋白理论分子量为58.28 kDa,等电点为9....

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 MMP的结构、分类和功能
    1.3 MMPs的三级结构
    1.4 MMPs的生物活性分子调节
    1.5 MMPs的伤口愈合机制
    1.6 MMPs的研究现状
    1.7 本研究基因的现状、目的及意义
第2章 三角帆蚌基质金属蛋白酶MMP1，19 基因克隆及原核表达
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 菌株和质粒
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 主要试剂盒
        2.2.5 主要仪器设备
        2.2.6 总RNA的提取
        2.2.7 三角帆蚌SMART cDNA的合成
        2.2.8 HcMMP1基因和HcMMP19基因的克隆
        2.2.9 HcMMPs基因的生物信息学分析
        2.2.10 HcMMP1和Hc MMP19基因在三角帆蚌不用组织中的表达
        2.2.11 嗜水气单胞菌和肽聚糖刺激后HcMMP1和HcMMP19基因的表达
        2.2.12 建立三角帆蚌损伤模型
        2.2.13 利用RT- PCR技术检测表达变化
        2.2.14 MMP1基因和MMP19基因的原核表达
    2.3 实验结果
        2.3.1 三角帆蚌的总RNA
        2.3.2 HcMMP1和HcMMP19基因的cDNA全长克隆
        2.3.3 HcMMP1和HcMMP19基因cDNA全长序列及推导的氨基酸序列.
        2.3.4 MMPs基因序列的生物信息学分析
        2.3.5 推导MMPs氨基酸序列的同源性比对
        2.3.6 HcMMPs基因的系统进化树
        2.3.7 HcMMP1和HcMMP19基因的定量表达
        2.3.8 HcMMPs基因的重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达及纯化
        2.3.9 重组MMP19蛋白浓度测定
    2.4 讨论
第3章 结论与展望
    3.1 结论
    3.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3874567