模式识别受体在中华绒螯蟹特异性先天免疫中的功能研究
发布时间：2024-01-20 11:31
中华绒螯蟹是我国重要的养殖经济动物品种,是长江流域居民的重要传统食物。随着对其集约化养殖的大规模发展,由细菌,病毒或立克次氏体引起的各种疾病随之大规模爆发,造成了巨大的经济损失。因此针对该物种先天免疫系统以及生物防御机制的深入研究刻不容缓。先天免疫和适应性免疫(获得性免疫)是动物宿主(Host)防御病毒、细菌和寄生虫等病原体(Pathogen)的两种免疫防御形式,两者间本质的区别在于：适应性免疫包括抗原特异性识别和免疫记忆,而先天免疫则没有。目前认为,先天免疫存在于所有后生动物中,而适应性免疫则仅存在于高等脊椎动物。无脊椎动物先天免疫“非己”识别的基础是其体内存在某些模式识别受体(PRRs),能够特异性地识别并结合病原体表面保守的病原相关分子模式(PAMPs),如脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和葡聚糖(GLU)等。通过识别PAMPs,这些受体可以激活免疫系统中的蛋白酶以及通过免疫细胞内的信号转导途径引发免疫反应。本研究通过RNA-Seq高通量二代测序技术,构建了中华绒螯蟹血细胞经病原相关模式分子差异诱导后的转录组文库,从中筛选得到了无脊椎动物重要的模式识别受体分子。其中C型凝集素蛋...
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
第一节 无脊椎动物免疫系统
1.1 引言
1.2 细胞免疫
1.3 体液免疫
第二节 无脊椎动物免疫特异性分子机制
2.1 引言
2.2 免疫分子通过基因组分子多样性产生的免疫特异性
2.3 免疫分子之间通过协同交互作用产生的免疫特异性
2.4 免疫分子通过剂量效应产生的免疫特异性
第三节 研究意义及研究方案
3.1 研究意义
3.2 研究方案
第二章 基于RNA-Seq的中华绒螯蟹免疫特异性研究
第一节 前言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物免疫刺激与样本收集
2.2 核酸提取和质量检验
2.3 基于RNA-Seq的高通量二代测序及文库构建
2.4 数据分析
第三节 结果
3.1 核酸提取及质量控制
3.2 测序结果统计分析
3.3 序列组装
3.4 序列比对分析和基因注释
3.5 KEGG代谢通路注释分析
3.6 免疫基因注释
3.7 免疫基因的差异诱导表达特异性分析
第四节 讨论
第三章 C型凝集素家族分子EsLecA和EsLecG的免疫特异性功能研究
第一节 前言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物免疫刺激与样本收集
2.2 总RNA提取和第一链cDNA合成
2.3 EsLecA和EsLecG的基因全长克隆
2.4 序列比对分析和聚类分析
2.5 EsLecA和EsLecG的组织表达检测
2.6 LPS免疫刺激后的EsLecA和EsLecG的诱导表达检测
2.7 数据统计分析
2.8 重组蛋白表达载体构建
2.9 重组rEsLectin蛋白的表达和纯化
2.10 蛋白印记检测实验
2.11 重组rEsLectins蛋白的微生物凝集活性检测
2.12 重组rEsLectins蛋白的微生物生长抑制活性检测
2.13 重组rEsLectins蛋白的抗菌活性检测
2.14 重组rEsLectins蛋白的细胞调理作用检测
第三节 结果
3.1 EsLecA和EsLecG基因的克隆和序列分析
3.2 EsLecA和EsLecG的同源序列聚类分析
3.3 EsLecA和EsLecG的组织表达分析
3.4 LPS体内免疫刺激后EsLecA和EsLecG的诱导表达模式分析
3.5 重组rEsLectins蛋白的表达和纯化
3.6 重组rEsLectin蛋白的微生物结合活性
3.7 重组rEsLectin蛋白的微生物凝集活性
3.8 重组rEsLectin蛋白的微生物生长抑制活性和抗菌活性
3.9 重组rEsLectin蛋白的血细胞调理活性分析
第四节 讨论
第四章 肝胰腺特异性表达C型凝集素家族分子EsLecF的免疫特异性功能研究
第一节 引言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物体内免疫刺激和样品收集
2.2 总RNA的提取和第一条cDNA链的合成
2.3 EsLecF基因cDNA全长克隆
2.4 EsLecF基因表达模式分析
2.5 重组蛋白表达载体的构建
2.6 重组rEsLecF蛋白的表达和纯化
2.7 蛋白印记检测实验
2.8 重组rEsLecF蛋白的微生物凝集实验
2.9 重组rEsLecF蛋白的微生物生长抑制实验
2.10 重组rEsLecF蛋白的抗菌活性检测
2.11 重组rEsLecF蛋白的细胞调理活性检测
第三节 结果
3.1 EsLecF基因序列分析
3.2 EsLecF氨基酸序列聚类分析
3.3 EsLecF的转录表达模式分析
3.4 重组rEsLecF蛋白的表达与纯化
3.5 重组rEsLecF蛋白的微生物结合活性
3.6 重组rEsLecF蛋白的微生物凝集活性
3.7 重组rEsLecF蛋白的微生物生长抑制活性和杀菌活性
3.8 重组rEsLecF蛋白的细胞调理活性
第四节 讨论
第五章 免疫球蛋白超家族基因Dscam的外显子可变剪切及其免疫诱导特异性研究
第一节 前言
第二节 材料方法
2.1 实验动物的免疫刺激和样品收集
2.2 总RNA抽提和cDNA第一链合成
2.3 EsDscam基因全长的克隆
2.4 EsDscam外显子的可变剪切检测
2.5 序列比对分析和聚类分析
2.6 EsDscam基因的组织表达和免疫诱导表达检测
2.7 EsDscam跨模型和分泌型可变剪切亚型的检测
2.8 蛋白印记检测
2.9 EsDscam的细胞定位
2.10 数据统计分析
第三节 结果
3.1 EsDscam的序列分析
3.2 EsDscam外显子可变剪切
3.3 EsDscam序列比对分析和聚类分析
3.4 EsDscam的组织表达特异性
3.5 EsDscam的差异免疫诱导表达特异性分析
3.6 EsDscam的跨膜型和分泌型可变剪切亚型检测
3.7 EsDscam的亚细胞定位
第四节 讨论
本研究的特色与创新点
参考文献
附录
致谢
本文编号：3880763
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
第一节 无脊椎动物免疫系统
1.1 引言
1.2 细胞免疫
1.3 体液免疫
第二节 无脊椎动物免疫特异性分子机制
2.1 引言
2.2 免疫分子通过基因组分子多样性产生的免疫特异性
2.3 免疫分子之间通过协同交互作用产生的免疫特异性
2.4 免疫分子通过剂量效应产生的免疫特异性
第三节 研究意义及研究方案
3.1 研究意义
3.2 研究方案
第二章 基于RNA-Seq的中华绒螯蟹免疫特异性研究
第一节 前言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物免疫刺激与样本收集
2.2 核酸提取和质量检验
2.3 基于RNA-Seq的高通量二代测序及文库构建
2.4 数据分析
第三节 结果
3.1 核酸提取及质量控制
3.2 测序结果统计分析
3.3 序列组装
3.4 序列比对分析和基因注释
3.5 KEGG代谢通路注释分析
3.6 免疫基因注释
3.7 免疫基因的差异诱导表达特异性分析
第四节 讨论
第三章 C型凝集素家族分子EsLecA和EsLecG的免疫特异性功能研究
第一节 前言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物免疫刺激与样本收集
2.2 总RNA提取和第一链cDNA合成
2.3 EsLecA和EsLecG的基因全长克隆
2.4 序列比对分析和聚类分析
2.5 EsLecA和EsLecG的组织表达检测
2.6 LPS免疫刺激后的EsLecA和EsLecG的诱导表达检测
2.7 数据统计分析
2.8 重组蛋白表达载体构建
2.9 重组rEsLectin蛋白的表达和纯化
2.10 蛋白印记检测实验
2.11 重组rEsLectins蛋白的微生物凝集活性检测
2.12 重组rEsLectins蛋白的微生物生长抑制活性检测
2.13 重组rEsLectins蛋白的抗菌活性检测
2.14 重组rEsLectins蛋白的细胞调理作用检测
第三节 结果
3.1 EsLecA和EsLecG基因的克隆和序列分析
3.2 EsLecA和EsLecG的同源序列聚类分析
3.3 EsLecA和EsLecG的组织表达分析
3.4 LPS体内免疫刺激后EsLecA和EsLecG的诱导表达模式分析
3.5 重组rEsLectins蛋白的表达和纯化
3.6 重组rEsLectin蛋白的微生物结合活性
3.7 重组rEsLectin蛋白的微生物凝集活性
3.8 重组rEsLectin蛋白的微生物生长抑制活性和抗菌活性
3.9 重组rEsLectin蛋白的血细胞调理活性分析
第四节 讨论
第四章 肝胰腺特异性表达C型凝集素家族分子EsLecF的免疫特异性功能研究
第一节 引言
第二节 材料与方法
2.1 实验动物体内免疫刺激和样品收集
2.2 总RNA的提取和第一条cDNA链的合成
2.3 EsLecF基因cDNA全长克隆
2.4 EsLecF基因表达模式分析
2.5 重组蛋白表达载体的构建
2.6 重组rEsLecF蛋白的表达和纯化
2.7 蛋白印记检测实验
2.8 重组rEsLecF蛋白的微生物凝集实验
2.9 重组rEsLecF蛋白的微生物生长抑制实验
2.10 重组rEsLecF蛋白的抗菌活性检测
2.11 重组rEsLecF蛋白的细胞调理活性检测
第三节 结果
3.1 EsLecF基因序列分析
3.2 EsLecF氨基酸序列聚类分析
3.3 EsLecF的转录表达模式分析
3.4 重组rEsLecF蛋白的表达与纯化
3.5 重组rEsLecF蛋白的微生物结合活性
3.6 重组rEsLecF蛋白的微生物凝集活性
3.7 重组rEsLecF蛋白的微生物生长抑制活性和杀菌活性
3.8 重组rEsLecF蛋白的细胞调理活性
第四节 讨论
第五章 免疫球蛋白超家族基因Dscam的外显子可变剪切及其免疫诱导特异性研究
第一节 前言
第二节 材料方法
2.1 实验动物的免疫刺激和样品收集
2.2 总RNA抽提和cDNA第一链合成
2.3 EsDscam基因全长的克隆
2.4 EsDscam外显子的可变剪切检测
2.5 序列比对分析和聚类分析
2.6 EsDscam基因的组织表达和免疫诱导表达检测
2.7 EsDscam跨模型和分泌型可变剪切亚型的检测
2.8 蛋白印记检测
2.9 EsDscam的细胞定位
2.10 数据统计分析
第三节 结果
3.1 EsDscam的序列分析
3.2 EsDscam外显子可变剪切
3.3 EsDscam序列比对分析和聚类分析
3.4 EsDscam的组织表达特异性
3.5 EsDscam的差异免疫诱导表达特异性分析
3.6 EsDscam的跨膜型和分泌型可变剪切亚型检测
3.7 EsDscam的亚细胞定位
第四节 讨论
本研究的特色与创新点
参考文献
附录
致谢
本文编号：3880763
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