半滑舌鳎piwil2和pik3r1基因的克隆与表达分析

发布时间：2024-02-14 03:02

　　作为我国北方地区主要的人工养殖海水鱼类之一，半滑舌鳎以肉质鲜美闻名，的产量及市场需求量逐年增加。然而在自然条件下，雄性个体的发育远滞后于雌性，影响受精卵质量和数量。因而，从基因水平研究半滑舌鳎精子发生过程，对提高雄鱼精子质量，大规模培育优质、高产苗种，推动半滑舌鳎人工养殖业发展具有重大意义。 根据全基因组测序获得的部分序列信息，本研究对半滑舌鳎piwil2基因进行了cDNA全长克隆，表达分析，启动子甲基化水平检测及染色体定位。Piwil2基因全长3314bp，包括3’UTR92bp,5’UTR60bp,一个3162bp的开放阅读框（ORF），其编码的PIWIL2蛋白相对分子质量为117kDa，理论等电点为8.81，由1053个氨基酸残基组成。经预测分析，PIWIL2蛋白含有典型的piwi结构域和PAZ结构域，无信号肽位点，是Argonaute蛋白家族，Piwi亚家族的一员。RT-qPCR结果显示，在性成熟雌性、雄性半滑舌鳎的11种组织中，piwil2基因只在其性腺中特异表达，且精巢中的表达量明显高于卵巢。而在半滑舌鳎雌、雄仔鱼的性腺中，出膜后20天至80天时均检测不到piwil2基因表...

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【部分图文】：

图2-1半滑舌鳎遗传性别鉴定的电泳结果

组织块经固定透彻后，转入70%的乙醇中。如组织块较大长固定时间。保存于70%乙醇中的半滑舌鳎性腺组织，经水乙醇，然后经过二甲苯透明、石蜡浸润、固体石蜡包埋等步骤，置于尼康光学显微镜（Nikoneclipse80i）下观察以5~6μm为宜，组织切片的具体步骤参照[71]。为模....

图2-2性成熟半滑舌鳎性腺组织石蜡切片

还能观察到处于卵巢结构中央的大而明显的卵巢腔。二倍体生理雄鱼有完整的精巢结构精巢内有按区域分布的精小叶结构，精小叶外侧是输精管和储精囊。大多数精小叶内充精细胞，输精管、储精囊中也有大量成熟精子存在。一些二倍体雄鱼的精小叶中，精细已完全成熟并被排放到储精囊内，精小叶结构内显示出较多....

图3-1半滑舌鳎遗传性别鉴定的电泳结果

图3-1半滑舌鳎遗传性别鉴定的电泳结果。Fig3-1Electrophoresisofgeneticsexidentification.性别鉴定舌鳎幼鱼性腺部位的生理鉴定结果见图3-2。化后80天的仔鱼中，雌鱼、雄鱼的原始生殖细胞经过有丝分裂分别分化为原细胞....

图3-2半滑舌鳎不同发育时期性腺部位的石蜡切片观察

图3-2半滑舌鳎不同发育时期性腺部位的石蜡切片观察。a:出膜后80d仔鱼的精巢；b:出膜后8仔鱼的卵巢；c:出膜后95d仔鱼的精巢；d:出膜后95d仔鱼的卵巢；e:出膜后120d仔鱼的精巢；f:膜后120d仔鱼的卵巢；g:出膜后150d....

本文编号：3897637