三疣梭子蟹RXR基因在蜕皮和卵巢发育过程中的表达分析

发布时间：2024-02-22 06:38

　　为了研究维甲酸类X受体(RXR)基因在甲壳动物蜕皮和卵巢发育中的作用，本研究首先通过反转录PCR (RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)RXR基因(PtRXR)全长cDNA序列。序列分析表明：PtRXR cDNA全长1365bp，包含25bp的5’末端非编码区(UTR)，1140bp的开放阅读框(ORF)，以及200bp的3’UTR，该基因可编码379个氨基酸。PtRXR氨基酸序列包含从N端的A/B域(转录激活域)到C端的E域(配体结合域)4个核受体特征结构域。经氨基酸序列比对可知，PtRXR与其他已知甲壳动物的RXR氨基酸序列高度同源；系统进化树显示，PtRXR与其甲壳动物RXR聚在一起，并且与脊椎动物RXR的亲缘关系要近于昆虫的超气门蛋白(ultraspiracles,USP)。本研究运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测PtRXR的组织分布特性和在蜕皮、卵巢发育过程中的表达特征。组织分布研究显示PtRXR广泛存在于所检测的三疣梭子蟹组织，且高表达于卵巢和Y-器。蜕皮过程中，PtRXR在Y-...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
引言
1 绪论
    1.1 甲壳动物蜕皮
    1.2 甲壳动物卵巢发育
    1.3 蜕皮激素在蜕皮和卵巢发育中的作用
    1.4 甲基法尼酯在蜕皮和卵巢发育中的作用
    1.5 核受体家族
    1.6 RXR
        1.6.1 RXR-EcR-Ecs 模式
        1.6.2 RXR-MF 模式
    1.7 展望
2 PtRXR 全长 cDNA 的克隆及序列分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 试剂与耗材
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 引物设计与合成
        2.2.2 实验前期准备
        2.2.3 总 RNA 提取
        2.2.4 第一链 cDNA 合成
        2.2.5 RT-PCR
        2.2.6 3’RACE
        2.2.7 5’RACE
        2.2.8 PCR 产物的克隆及测序
        2.2.9 全长序列验证
        2.2.10 序列分析
    2.3 结果
        2.3.1 总 RNA 的提取
        2.3.2 PtRXR 全长 cDNA 的克隆
        2.3.3 PtRXR 序列特征
        2.3.4 PtRXR 的同源性分析
    2.4 小结
3 PtRXR 的组织分布特性
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要试剂和耗材
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 内参基因的选择
        3.2.2 引物设计与合成
        3.2.3 总 RNA 提取和模板 cDNA 合成
        3.2.4 RT-PCR 检测
        3.2.5 qRT-PCR 检测
    3.3 结果
        3.3.1 RT-PCR 检测结果
        3.3.2 qRT-PCR 检测结果
    3.4 小结
4 PtRXR 在蜕皮过程中的表达
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 主要试剂和耗材
        4.1.3 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 引物设计与合成
        4.2.2 总 RNA 提取和模板 cDNA 获得
        4.2.3 qRT-PCR 检测
    4.3 结果
    4.4 小结
5 PtRXR 在卵巢发育过程中的表达
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 主要试剂和耗材
        5.1.3 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 引物设计与合成
        5.2.2 总 RNA 提取和模板 cDNA 获得
        5.2.3 qRT-PCR 检测
    5.3 结果
        5.3.1 PtRXR 在一次卵巢发育过程中的表达
        5.3.2 PtRXR 在二次卵巢发育过程中的表达
    5.4 小结
6 结论
    6.1 序列分析
    6.2 PtRXR 的组织分布特性
    6.3 PtRXR 在蜕皮过程中的表达特征
    6.4 PtRXR 在卵巢发育过程中的表达特征
参考文献
在学研究成果
致谢



本文编号：3906545