不同生长阶段尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼ghr1和igf1的表达分析

发布时间：2024-02-27 01:13

　　动物生长受到生长轴的调控,生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子1(IGF1)是生长轴中的重要组成成分,其基因表达水平与生长密切相关,是研究生长和生产性状的候选基因,罗非鱼(Oreochromis spp)是重要的世界性养殖鱼类。本试验开展为期200天的罗非鱼生长对比试验,并利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, Q-PCR)技术对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)和奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)生长过程中肝脏和肌肉gh订和妒的表达水平进行了检测,为进一步阐述罗非鱼生长轴基因表达机制、利用分子手段对罗非鱼进行选育等工作提供理论依据。以β-actin为内参基因,建立了以SYBR Green染料为荧光指示剂的罗非鱼ghr1和igf1的Q-PCR实验平台。实验构建了含有ghr1,igf1和fl-actin特异性片段的标准质粒作为标准品,5倍梯度稀释后以3次平行重复进行Q-PCR扩增,根据所得到的标准曲线和Ct值计算三个基因的拷贝数,以β-actin为看家基因校对,最终确定ghr1和igf1的相对表达量。结果...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1. 生长激素(GH)
        1.1 GH基因和蛋白结构
        1.2 作用机制
        1.3 生理功能
    2. 研究生长轴机制的意义
    3. 生长激素受体(GHR)和生长激素结合蛋白(GHBP)
        3.1 ghr结构和mRNA种类
        3.2 GHR蛋白结构
        3.3 GHBP蛋白结构和功能概述
        3.4 GHR的作用机制
        3.5 ghr表达的组织特异性和时空变化
        3.6 ghr表达水平的调节
        3.7 ghr表达水平与生长的关系
    4. 胰岛素样生长因子家族(IGFs)
        4.1 IGFs基因和蛋白结构
        4.2 胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)
        4.3 胰岛素样生长因子受体(IGFR)
        4.4 IGFs和IGFR的作用机制
        4.5 IGF1的生理作用
        4.6 igf1表达的组织特异性和时空变化
        4.7 igf1表达的调节
        4.8 igf1表达与生长的关系
    5. 实时荧光定量PCR
        5.1 实时荧光定量PCR原理
        5.2 实时荧光定量PCR标记方法
    6. 研究对象、意义和技术路线
        6.1 研究对象和实验意义
        6.2 技术路线
第二章 ghr1和igf1实时荧光定量PCR实验平台的建立
    1. 试验材料
    2 实验试剂和仪器
        2.1 试剂
            2.1.1 RNA提取相关试剂
            2.1.2 目的片段回收相关试剂
            2.1.3 实时荧光定量PCR相关试剂
            2.1.4 琼脂糖凝胶电泳相关试剂
            2.1.5 培养基
        2.2. 实验仪器
    3. 实验方法
        3.1 罗非鱼肝脏和肌肉组织总RNA的提取(Trizol法)
        3.2 cDNA的制备
        3.3 标准质粒的制备
            3.3.1 目的片段的扩增
            3.3.2 目的片段的回收纯化
            3.3.3 目的片段与质粒载体的连接
            3.3.4 感受态细胞的制备
            3.3.5 感受态细胞的转化
            3.3.6 质粒抽提和鉴定
        3.4 荧光定量PCR实验平台的建立
            3.4.1 反应体系
            3.4.2 制备标准曲线
            3.4.3 建立熔解曲线
        3.5 平台的初步检测
    4. 实验结果
        4.1 RNA的抽提和鉴定结果
        4.2 cDNA样品的制备与检测
        4.3 质粒标准品的制备和鉴定
        4.4 扩增曲线及熔解曲线分析
        4.5 标准曲线的制作
        4.6 目的基因相对表达量的计算
            4.6.1 标准质粒的初始拷贝数
            4.6.2 目的基因相对表达量的计算
        4.7 平台的初步检测结果
    5. 讨论
第三章 不同生长阶段尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼肝脏和肌肉中ghr1和igf1表达水平的检测
    1. 实验材料和养殖管理
    2. 试剂和仪器
    3. 方法
        3.1 RNA提取和cDNA的制备
        3.2 各组织定量分析
    4. 数据分析
    5. 结果
        5.1 尼罗罗非鱼和奥利亚体重的变化
        5.2 尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼肝脏ghr1和igf1表达量
        5.3 尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼肌肉ghr1和igf1表达量
    6. 讨论
全文结论
参考文献
附录 实验试剂及配置
致谢
科研情况



本文编号：3912146