鳜传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗检验关键技术研究

发布时间：2024-03-25 00:59

　　由鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)引起的鳜虹彩病毒病是危害鳜养殖产业最主要疫病,而疫苗接种是预防该病最为有效的技术手段。在疫苗制备过程中,安全性和效力是评价疫苗质量重要指标,而灭活快速检验及抗原含量测定是评价灭活疫苗安全性和效力的关键技术,因此本论文针对ISKNV灭活疫苗制备中关键问题,开展了ISKNV灭活快速检验及有效抗原含量测定方法研究及应用,旨在提高ISKNV灭活疫苗生产效率和疫苗质量,取得的主要结果如下:1、从ISKNV感染CPB细胞转录谱中筛选并验证病毒早期基因ORF099基因表达量最高,以该基因转录本作为靶标,建立了基于荧光定量RT-PCR监测病毒mRNA的灭活快速检测方法。首先,以含ISKNV ORF099基因质粒作为模板,采用qPCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=-3.42lgx+39.455(R2=0.998),最低检测限为3拷贝/μL,重复试验结果显示组间和组内变异系数均小于2%。病毒转录本灵敏度实验显示在第7 d即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1Real-timePCR绝对定量标准曲线

图2-1Real-timePCR绝对定量标准曲线ThestandarddilutionseriesofabsolutelyquantitR的灵敏度和重复性pMD099各稀释度样品进行荧光定量PC

图2-2基于ORF099基因的ISKNV荧光定量PCR检测方法的灵敏度和重复性

ORF099基因的定量分析。(a)(b)图2-2基于ORF099基因的ISKNV荧光定量PCR检测方法的灵敏度和重复性(a)1-11．质粒拷贝数分别为3×1010、3×109、3×108、3×107、3×106、3×105、3×104、3×103、3×102、3×101、3....

图2-3ISKNV感染CPB细胞总RNA中gDNA去除验证（误差线表示标准差的值）

(a)(b)图2-3ISKNV感染CPB细胞总RNA中gDNA去除验证（误差线表示标准差的值）（a）表示稀释病毒液接种CPB细胞7d（U-A，R-A）和11d（U-B，R-B）后提取的R品，U-A\U-B表示未去除gDNA的RNA，R-A....

图2-4荧光定量RT-PCR检测ISKNV感染CPB细胞后病毒基因转录数量（误差线表示标准差的值）

2-4荧光定量RT-PCR检测ISKNV感染CPB细胞后病毒基因转录数量（误差线表示标准差的值）Fig.2-4qRT-PCRdetectionofISKNVtranscriptsafterISKNVinfectedCPBcells(error....

本文编号：3938292