大鲵凝集素多克隆抗体制备的研究

发布时间：2024-04-02 02:31

　　近年来,大鲵养殖产业得到了快速发展。同时,在大鲵养殖过程中也出现了各种各样的病害问题,这已经严重威胁到了大鲵养殖业的发展。因此,对于养殖过程中大鲵的健康状况的研究可以促进大鲵健康养殖。大鲵体表黏液凝集素(ADL)是大鲵的重要免疫分子之一,它的数量变化可以直接反映出大鲵的健康状况。本论文利用ELISA方法建立了一种快速检测ADL数量的方法,以期为大鲵的健康养殖提供基础数据。具体工作如下:1.以提取纯化后的ADL为完全抗原,经免疫程序免疫新西兰白兔制备抗ADL的抗血清,获得的抗血清效价为51200。用BSA、OVA、MCL-T来检测抗体特异性,结果表明得到的抗血清特异性较好。2.以抗ADL抗体为基础建立间接非竞争ELISA方法,并优化了抗原抗体最佳稀释度、抗体反应时间、显色时间等实验条件。结果表明,多克隆抗体的最适稀释度为1:3000,一抗反应时间为1 h,二抗反应时间为1 h,显色时间为20 min,在31.25¹000 ng/mL的范围内,ADL浓度的对数值和吸光度之间具有较好的线性关系,添加回收率为91.5¹09.5%。重复性实验表明,其板...

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 大鲵简介
    1.2 凝集素
        1.2.1 凝集素的定义
        1.2.2 凝集素的分类
        1.2.3 凝集素的生物学性质
        1.2.4 大鲵体表黏液
    1.3 酶联免疫测定方法
    1.4 课题研究目的、意义及内容
        1.4.1 课题研究目的及意义
        1.4.2 课题研究内容
    1.5 技术路线
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 免疫对象
        2.1.2 材料与试剂
        2.1.3 相关溶液的配制
        2.1.4 仪器与设备
    2.2 大鲵凝集素多克隆抗体的制备及评价
        2.2.1 多克隆抗血清的制备
        2.2.2 抗血清的分离及保存
        2.2.3 抗ADL效价测定
        2.2.4 抗ADL抗体特异性
    2.3 间接非竞争ELISA方法的建立及优化
        2.3.1 抗原最佳包被浓度及抗体稀释度的确定
        2.3.2 包被液的选择
        2.3.3 包被条件的选择
        2.3.4 封闭液的选择
        2.3.5 一抗反应时间的选择
        2.3.6 二抗反应时间的选择
        2.3.7 显色时间的选择
        2.3.8 间接ELISA标准曲线的绘制
        2.3.9 间接ELISA检测方法的评价
    2.4 大鲵样本的测定
        2.4.1 大鲵样本的处理
        2.4.2 大鲵样本总蛋白含量测定
        2.4.3 大鲵样本ADL含量检测
    2.5 ADL检测试剂盒的组装及评价
3 结果与讨论
    3.1 抗ADL抗体制备及评价
    3.2 抗原抗体最佳稀释度的选择
    3.3 包被液的选择
    3.4 包被条件的选择
    3.5 封闭液的选择
    3.6 一抗反应时间的选择
    3.7 二抗反应时间的选择
    3.8 显色时间的选择
    3.9 ADL间接ELISA标准曲线的绘制
    3.10 间接ELISA方法的评价
        3.10.1 添加回收实验
        3.10.2 精密度实验
    3.11 大鲵样本测定
        3.11.1 大鲵样本总蛋白含量测定
        3.11.2 大鲵样本ADL含量检测
    3.12 ADL试剂盒评价
        3.12.1 37℃保存实验
        3.12.2 低温保存实验
结论
参考文献
攻读学位期间发表的论文目录
致谢



本文编号：3945683