罗非鱼无乳链球菌PLGA微球疫苗的制备及免疫效果研究

发布时间：2024-04-07 04:23

　　本研究以罗非鱼养殖场患病鱼体上分离到的无乳链球菌为疫苗菌株,以乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为佐剂,采用复乳溶剂挥发法制备PLGA包埋无乳链球菌全菌及菌体超声破碎后上清物的微球疫苗,探讨了粒径适于口服的微球疫苗的制备工艺,测定了微球的包埋和释放特性,最后经口服免疫罗非鱼,研究了罗非鱼对口服缓释微球疫苗的特异性和非特异性免疫反应以及其对罗非鱼的免疫保护效果。主要内容与结果如下： 1、无乳链球菌PLGA微球疫苗的制备条件及其特性分析 通过控制变量法探讨微球疫苗制备过程中PLGA浓度、PVA(聚乙烯醇)浓度和外水相体积对所制备微球粒径的影响。显微镜观察结果显示随着PLGA浓度、PVA浓度和外水相体积的增加,上清微球平均粒径均随之增大。最终确定上清微球制备条件为PLGA浓度25mg·mL^-1、PVA浓度为1mg·mL^-1、外水相体积20mL。全菌微球制备条件与上述的相比,仅PVA浓度调整为2mg·mL^-1。扫描电镜观察显示全菌和上清微球平均粒径分别为9.4μm和3.9μm,微球均呈球形。BCA法测定包封率分别为68.07%和6...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1无乳链球菌菌体超声处理效果.A.超声处理前；B.超声处理后Fig.2-1UltrasonictreatmenteffectofGBS.A.beforeultrasonication；B.afterultrasonication

经福尔马林灭活的GBS菌液超声处理后,革兰氏染色观察可见GBS链状菌体断幵，由链状分布变为球状或双球分布（图2-1)，这有利于包埋进PLGA微球。A / >jrv ^ ?,、、-???-、、一. 、从Z ；*. ?,、? X\ ?.\ ” 4-图2-1无乳链球菌菌体超....

图2-2全菌微球包埋效果（左）及其电镜观察（右）

粒径分布相对集中，有未包埋入微球的菌体吸附在微球表面（图2-2)。经SDS-PAGE检测，上清微球溶解液中有蛋白存在，说明破碎后上清也有效包埋入微球。电镜照片显示微球表面光滑无粘连，粒径分布较均匀（图2-3)。PBS微球粒径分布范围较广，且较大的微球表面有小孔（图2-4)。图2-....

图2-3上清微球包埋效果及电镜观察M.蛋內标记；].GBS破碎后沉淀；2.GBS破碎后上清；3.上清微球溶解液

经SDS-PAGE检测，上清微球溶解液中有蛋白存在，说明破碎后上清也有效包埋入微球。电镜照片显示微球表面光滑无粘连，粒径分布较均匀（图2-3)。PBS微球粒径分布范围较广，且较大的微球表面有小孔（图2-4)。图2-2全菌微球包埋效果（左）及其电镜观察（右）Fig.2-2The....

图2-4电镜下的PBS微球

电镜照片显示微球表面光滑无粘连，粒径分布较均匀（图2-3)。PBS微球粒径分布范围较广，且较大的微球表面有小孔（图2-4)。图2-2全菌微球包埋效果（左）及其电镜观察（右）Fig.2-2Theembeddingeffectofmicroparticlecontain....

本文编号：3947671