海参溶菌酶的功能、活性及其非酶抑菌活性位点的分析

发布时间：2024-04-20 04:17

　　海参是我国沿海城市重要的经济养殖物种,近年来,由于集约化养殖,导致其生存环境日益恶化,使海参病害问题日益严重。研究表明,海参在面对微生物感染时,会出现两条免疫应激策略。产生抗菌肽,如海参溶菌酶,通常情况下直接破坏病原菌机体;产生过量活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。但是,过量的ROS本身对机体具有严重的毒害作用。生物体的抗氧化防御系统(SOD和CAT),可以平衡ROS,维持机体的氧化还原平衡。因此深入研究海参的相关免疫机制,了解免疫相关蛋白的性质和功能将能有效增强海参抗病能力,对深入探讨仿刺参的抗氧化及免疫功能有着重要的作用。本研究主要深入讨论了海参溶菌酶及过氧化氢酶的作用和功能。在活体水平上,实验首次分析了海参i型溶菌酶在各个组织中的分布,初步确定了海参溶菌酶的免疫功能。研究发现,海参溶菌酶的量在触手中最多,呼吸树次之,而在肠中最少,体腔细胞和体壁中海参溶菌酶的量基本持平。灿烂弧菌免疫刺激后,海参体腔中的海参溶菌酶含量持续增加,在48 h时含量达到最多,之后海参溶菌酶含量会逐渐降低。在细胞水平上,利用基因沉默技术分析了海参i型溶菌酶对病原菌的免疫抑制作...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１海参各组织ＲＮＡ提取??

７〇〇ｂｐ—??５００ｂｐ—??图３－２内参基因（３－ａｃｔｉｎ的ＰＣＲ扩增??Ｆｉｇ．?３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ?ｇｅｎｅ?ｐ－ａｃｔｉｎ??３０??

图３－２内参基因（３－ａｃｔｉｎ的ＰＣＲ扩增??

法提取海参各个组织的总ＲＮＡ。??１．５％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??图３－１海参各组织ＲＮＡ提取??Ｆｉｇ．?３－１?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ??１．５％琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ....

图３－３海参溶菌酶组织分布??Ｆｉｇ．?３－３?Ｔｉｓｓｕｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｌｙｓｏｚｙｍｅ??利用ＲＴ－ＰＣＲ检测海参溶菌酶蛋白在各个组织中的分布

法提取海参各个组织的总ＲＮＡ。??１．５％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??图３－１海参各组织ＲＮＡ提取??Ｆｉｇ．?３－１?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?ｓｅａ?ｃｕｃｕｍｂｅｒ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｓ??１．５％琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ....

图３－４海参体腔细胞ＲＮＡ提取??－

取总ＲＮＡ，?１．５％琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ提取产物。结果显示，各个时间段提取的产??物都有三条明显的条带，与ＲＮＡ条带基本一致，分别为２８Ｓ、１８Ｓ、５Ｓ，说明提取ＲＮＡ??成功（图３－４）。对各个组织的ＲＮＡ进行反转录，以内参基因验证，结果表明转录成功??（图?３－５）。?....

本文编号：3958867