草鱼三个PI3K/AKT通路相关基因的克隆和表达分析

发布时间：2024-04-21 21:00

　　草鱼(Ctenopharyngodon idella)是世界养殖产量最高的鱼类。草鱼易受病原体感染,一旦感染又易引发大面积死亡,给养殖业带来重大损失。由于水产疫苗的匮乏和施药方式易对水体造成污染,选育抗病力强的草鱼良种,成为了防治草鱼病害的有效途径。PI3K/AKT信号通路,是一种以磷酸化为基础的信号通路。有关草鱼PI3K/AKT信号通路的研究还是空白。本论文克隆了草鱼三个PI3K/AKT相关基因:AKT1、AKT3以及NFIL3,分析了基因序列和预测氨基酸序列的理化性质,根据同源氨基酸序列构建了系统进化树。用嗜水气单胞菌人工感染草鱼,检测了3个基因在4种草鱼免疫相关组织中的表达情况。选取NFIL3基因作为深化对象,研究了其超表达对于细菌入侵草鱼CIK细胞的影响。取得了以下结果:1.通过同源克隆和RACE法得到草鱼AKT1、AKT3和NFIL3基因的全长c DNA序列,分别为1554bp,2808bp,2018bp;分别含有编码384(1155bp),479(1440bp),468(1407bp)个氨基酸的开放阅读框,预测出的氨基酸序列均无信号肽位点。2.BLAST分析发现,草鱼AKT...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1草鱼AKT1基因cDNA扩增图：图a为AKT1基因3’RACE扩增产物，

没有信号肽切割位点。ScanProsite结果显示AKT1预测氨基酸序列有一个典型的PH区域-位于氨基酸残基5-108位点，一个蛋白激酶区域-位于氨基酸残基143-384位点，还有一个丝氨酸/苏氨酸激酶活化位点-位于氨基酸残基263-275位点，这三个特征与A....

图2-2使用ClustalW对不同鱼类的AKT1氨基酸进行比对分析

图2-2使用ClustalW对不同鱼类的AKT1氨基酸进行比对分析。黑色直线表示PH区域，黑色线段表示蛋白激酶区域，黑色矩形框表示丝氨酸/苏氨酸激酶活化位点。GenBank登录号分别为：zebrafish（斑马鱼，NP_001268730.1）;fugu（红....

图2-3草鱼AKT3基因cDNA扩增图：图a为AKT3基因3’RACE扩增产物，图b为AKT3

确定了没有信号肽切割位点。ScanProsite结果显示AKT1蛋白有一个典型的PH（pleckstrinhomology）区-位于氨基酸残基5-107位点，一个蛋白激酶区域-位于氨基酸残基148-405位点，还有一个丝氨酸/苏氨酸激酶活化位点-位于氨基酸残基2....

图2-4使用ClustalW对不同物种的AKT3氨基酸进行比对分析

图2-4使用ClustalW对不同物种的AKT3氨基酸进行比对分析。黑色带箭头直线表示PH区域，黑色线段表示蛋白激酶区域，黑色虚线矩形框表示丝氨酸/苏氨酸激酶活化位点。各序列的GenBank登录号分别为：zebrafish（斑马鱼，Daniorerio，NP....

本文编号：3961445