草鱼STAT6上调CCL20和BCL-XL的表达

发布时间：2024-05-12 01:21

　　信号转导和转录激活因子6(STAT6)属于分类的DNA结合蛋白家族,是一种广谱转录调节因子,具有一些保守的结构域,例如N-末端结构域,卷曲螺旋结构域,DNA结合结构域和SH2结构域。在哺乳动物中,病毒、生长因子、细胞因子和IFN-α都可激活STAT6。磷酸化的STAT6发生同源二聚化然后移位至细胞核,将信号从受体复合物传递到细胞核以调节相关基因的转录和表达进而参与正常的细胞反应。近年来,有研究表明STAT6不但在免疫系统的调节过程中起重要作用,而且还参与细胞增殖和细胞凋亡等活动。STAT6通过调节免疫相关基因和各种细胞凋亡功能基因来参与细胞免疫应答和细胞凋亡。STAT6调节各种免疫细胞、趋化因子CCL2、CCL20和CCL26的转录和表达,负责免疫细胞归巢,参与细胞炎症反应。另一方面,STAT6通过上调各种抗凋亡基因的表达来抑制细胞凋亡。例如,IL-4的抗细胞凋亡活性是通过激活STAT6和随后Bcl-xl的转录表达来介导。相反,STAT6沉默诱导凋亡相关基因Bax的表达并抑制抗凋亡基因Bcl-xl的表达。简而言之,STAT6具有多种生物学功能。STAT6的结构,表达和基于酪氨酸的磷酸化...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 STATS家族
    1.2 STAT6
        1.2.1 STAT6蛋白的结构
        1.2.2 STAT6生物学功能
        1.2.3 STAT6信号转导通路
    1.3 CCL20 的生物学功能
    1.4 BCL-XL的生物学功能
    1.5 鱼类STAT6研究进展
    1.6 研究目的与意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验试剂与仪器设备
        2.1.1 主要实验试剂
        2.1.2 主要实验试剂盒
        2.1.3 主要实验仪器设备
    2.2 细胞株、载体与菌种
    2.3 实验材料
    2.4 相关软件
    2.5 引物表
    2.6 实验方法
        2.6.1 草鱼STAT6全长cDNA的克隆
        2.6.2 草鱼CCL20 启动子的克隆
        2.6.3 草鱼STAT6的系统进化分析
        2.6.4 细胞培养
        2.6.5 草鱼STAT6在CIK细胞与组织中的表达水平分析
        2.6.6 真核表达载体构建
        2.6.7 草鱼STAT6亚细胞定位
        2.6.8 草鱼STAT6同源二聚化
        2.6.9 草鱼STAT6调控CCL20和BCL-XL
        2.6.10 草鱼STAT6增强细胞存活率和抗凋亡机制
第三章 结果与分析
    3.1 草鱼STAT6的克隆及其分析
        3.1.1 草鱼STAT6全长c DNA的克隆
        3.1.2 草鱼STAT6基因序列分析
        3.1.3 草鱼STAT6基因的系统进化分析
    3.2 草鱼STAT6基因的定量表达分析
        3.2.1 草鱼STAT6基因的组织表达分析
        3.2.2 草鱼STAT6基因在CIK细胞中的表达分析
    3.3 草鱼STAT6的同源二聚化分析
        3.3.1 草鱼STAT6亚细胞定位分析
        3.3.2 免疫荧光共定位分析
        3.3.3 免疫共沉淀分析
    3.4 草鱼STAT6对CCL20和BCL-XL转录调控分析
        3.4.1 双荧光素酶分析
        3.4.2 过表达草鱼STAT6,CCL20和BCL-XL实时荧光定量PCR分析
        3.4.3 敲降草鱼STAT6,CCL20和BCL-XL实时荧光定量PCR分析
    3.5 草鱼STAT6对细胞活力的影响
    3.6 草鱼STAT6抑制细胞凋亡
        3.6.1 Hoechst33258 染色分析
        3.6.2 TUNEL分析
第四章 讨论
第五章 主要结论、创新点及研究展望
    5.1 主要结论
    5.2 创新点
    5.3 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间发表论文



本文编号：3970647