大鲵细菌病原的分离鉴定与嗜水气单胞菌灭活疫苗的免疫应答研究

发布时间：2024-06-07 18:57

　　中国大鲵(Andrias davidianus),俗称娃娃鱼,为我国特有珍稀两栖动物,主要分布于四川、湖北、湖南、贵州、陕西等省份,已列入国家二级保护动物名录,并被列入CITES公约附录Ⅰ中。近些年,各地相继对大鲵人工繁殖和养殖技术展开了研究,推动了全国大鲵养殖业的快速发展。然而,随着大鲵养殖规模的不断扩大及养殖集约化程度的不断提高,大鲵病害问题日趋严重,给大鲵养殖业造成了巨大的经济损失。本研究取患病濒死大鲵肝脏分离细菌,利用Biolog微生物鉴定系统及16SrDNA序列分析对纯培养细菌进行鉴定,然后进行健康大鲵人工感染试验,通过其病征及病原菌再分离鉴定确定病原菌,同时对该病原菌进行药物敏感试验。从患病濒死大鲵肝脏中分离到一株病原菌YZ01,经Biolog微生物鉴定系统的鉴定及16S rDNA序列的系统发育分析表明,该病原菌为类志贺邻单胞菌,且通过人工感染试验,可致健康大鲵与自然患病大鲵相同的症状并再次分离到该病原菌。药物敏感试验表明,该菌株对头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素和头孢呋辛等18种药物敏感。本研究以福尔马林灭活的大鲵嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)作为免疫...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 中国大鲵
        1.1 大鲵资源
        1.2 大鲵的生物学特性
        1.3 大鲵的价值及养殖现状
    2 大鲵病害研究进展
        2.1 大鲵细菌性疾病
            2.1.1 大鲵细菌性败血症
            2.1.2 大鲵腹水病
            2.1.3 大鲵赤皮病
            2.1.4 大鲵肠炎病
        2.2 大鲵真菌性疾病
        2.3 大鲵寄生虫疾病
            2.3.1 吸虫病
            2.3.2 线虫病
        2.4 大鲵病毒性疾病
        2.5 大鲵非寄生性疾病
    3 血液指标研究
        3.1 血细胞参数
            3.1.1 红细胞参数
            3.1.2 白细胞参数
        3.2 酶学指标
            3.2.1 溶菌酶
            3.2.2 超氧化物歧化酶
            3.2.3 过氧化氢酶
            3.2.4 碱性磷酸酶
            3.2.5 酸性磷酸酶
            3.2.6 酚氧化酶
    4 疫苗免疫佐剂的应用研究
        4.1 铝盐佐剂
        4.2 油乳佐剂
        4.3 蜂胶佐剂
        4.4 微生物佐剂
            4.4.1 细菌毒素
            4.4.2 葡聚糖
            4.4.3 分枝杆菌菌苗
            4.4.4 肽聚糖
        4.5 分子佐剂
            4.5.1 细胞因子
            4.5.2 热休克蛋白
            4.5.3 CpG-DNA佐剂
        4.6 其他佐剂
            4.6.1 维生素E和硒
            4.6.2 中药多糖
            4.6.3 免疫刺激复合物
    5 研究目的和意义
第二章 患病大鲵类志贺邻单胞菌的分离与鉴定
    1 材料及方法
        1.1 材料
            1.1.1 试验动物及饲养条件
            1.1.2 主要试剂和仪器
        1.2 病原菌分离及培养
        1.3 人工感染试验
        1.4 Biolog微生物自动鉴定仪
        1.5 16S rDNA序列的扩增与测序
        1.6 序列分析与系统发育树的构建
        1.7 药敏试验
    2 结果
        2.1 病原菌的菌落形态特征
        2.2 人工感染试验
        2.3 Biolog微生物自动鉴定
        2.4 序列分析与系统发育树的构建
        2.5 药敏试验
    3 讨论
第三章 嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫后大鲵外周血免疫指标的变化研究
    1 材料与方法
        1.1 试验大鲵与暂养
        1.2 供试菌株及其培养
        1.3 免疫原与吞噬原的制备
        1.4 灭活疫苗的安全性试验
        1.5 免疫与采血
        1.6 免疫指标检测
        1.7 攻毒感染试验
        1.8 实验数据分析
    2 结果
        2.1 无菌检验与鱼体安全性试验
        2.2 血细胞计数
        2.3 白细胞分类计数
        2.4 吞噬细胞吞噬活性
        2.5 血清抗体效价
        2.6 相对免疫保护力
    3 讨论
第四章 不同佐剂对大鲵嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果的比较研究
    1 材料与方法
        1.1 菌种来源
        1.2 试验动物
        1.3 免疫原的制备
        1.4 灭活疫苗的安全性试验
        1.5 佐剂疫苗制备
            1.5.1 蜂胶佐剂疫苗的制备
            1.5.2 弗氏佐剂疫苗的制备
            1.5.3 铝胶佐剂疫苗的制备
            1.5.4 不含佐剂疫苗的制备
        1.6 免疫与采血
        1.7 血清抗体效价检测
        1.8 攻毒感染试验
    2 结果
        2.1 疫苗无菌检验与安全性试验
        2.2 血清抗体效价
        2.3 相对免疫保护力
    3 分析与讨论
总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文



本文编号：3990956