转基因斑马鱼和罗非鱼耐寒性能的研究

发布时间：2025-04-11 00:57

　　虽然通过传统的杂交育种和选育的方法培育出了在北方地区生长速度快、抗寒力强的荷包红鲤、高寒鲤抗寒品系等优良品种，但鲮鱼(Cirrhinusmolitorella)、罗非鱼等还不能依靠传统的育种方法获得抗寒品系。这就要求从基因表达水平研究鱼类的耐低温机制，本实验主要是研究东北地区的具有耐低温性状的黑龙江鲤(Cyprinus carpio)的MIPS基因在斑马鱼和罗非鱼中的表达情况。 构建的外源表达载体在斑马鱼中的荧光观察结果显示，两个重组表达载体均不影响EGFP的表达，只是表达强度存在一定差异，未插入外源目的基因的重组表达载体中EGFP基因的表达强度明显高于插入外源目的基因的重组表达载体EGFP基因的表达。重组表达载体的成功构建显示金鱼Tgf2转座子和普通表达载体可以介导外源基因在斑马鱼中的表达。 对转基因斑马鱼F1、F2代和转基因罗非鱼F1代进行PCR检测，结果显示靶基因MIPS的编码区能够完整的整合到斑马鱼和罗非鱼基因组中，检测注射pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的转基因斑马鱼F1代整合效率达31.4%；检测注射普通表达载体的转基因斑马鱼F1代整合效率达30.4%；检测注射...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2.1MCS序列

都是国产分析纯产品。引物合成及测序由北京英俊生物技术公司完成。验仪器pendorf梯度PCR仪（Mastercyclergradient），紫外照相仪。验方法CS序列设计与合成用Primerpremier5.0软件设计多克隆位点序列，从酶切位点表中选择表达载靶基因....

图2.2pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的构建过程

图2.2pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的构建过程Fig.2.2theestablishmentprocessofpTgf2-EF1α-MCS-EGFP.4表达载体pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR和酶切验证表达载体pTgf2-EF1....

图2.3MCS序列的PCR扩增Fig.2.3thePCRamplificationofMCSsequence

与分析S序列的PCR扩增与克隆验设计的MCS长度为121bp，经PCR扩增成功获得双链的MCS序列，如图1bp处箭头所指的条带即为扩增出的MCS序列，扩增片段大小符合所设计其克隆至PMD18-T质粒中，菌落PCR结果如图2.3b图，在121bp....

图2.4表达载体pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR扩增与酶切Fig.2.4thePCRamplificationandenzymedigestionofexpressionvectorpTgf2-EF1α-MCS-EGFP

18图2.4表达载体pTgf2-EF1α-MCS-EGFP的PCR扩增与酶切Fig.2.4thePCRamplificationandenzymedigestionofexpressionvectorpTgf2-EF1α-MCS-EGFP图2.5质粒....

本文编号：4039255