大白菜遗传转化体系的优化
发布时间：2021-08-09 03:28
高效简单的遗传转化是开展基因功能分析和基因工程的基础。本试验以花粉为转化受体,进行超声波处理,对大白菜花粉处理的花粉悬浮液浓度和超声波功率参数进行了选择,对卡那霉素的抗性浓度也进行了筛选。同时,本试验对抽薹大白菜植株进行了真空渗入处理。得到以下结论。1.将大白菜花粉作为转化受体时,能最大限度的保持渗透压的平衡,使花粉能保持正常形态而不至于吸水太多导致胀破的花粉悬浮液蔗糖浓度为0.4 mol/L。2.在工作时间5 s、间隔时间5 s、处理次数8的条件下,对大白菜花粉超声波功率进行了筛选,最终选择的适宜超声波功率为90W。3.通过对白菜幼芽子叶的颜色、生长点以及根的生长状况的观察分析,认为大白菜种子抗性筛选适宜的卡那霉素质量浓度为30 mg/L。4.采用真空渗入法,将萝卜VPE1基因的干扰载体pRNAi-RsVPE1转化大白菜,共收获2414粒种子,在质量浓度为30 mg/L的卡那霉素筛选下获得抗性株297株,其中9株经PCR检测呈阳性,转化率为0.37%。Real-time PCR检测结果表明:pRNAi-RsVPE1的转入导致了转基因大白菜叶片中同源的BraVPE在RNA水平上的表达量...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 DNA直接导入法
1.2 农杆菌介导法
1.2.1 农杆菌介导的叶盘转化法
1.2.2 农杆菌介导的原位转化法
1.3 本研究的目的与意义
第二章 大白菜花粉介导转基因的几个因素优化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 不同蔗糖浓度花粉悬浮液对花粉形态的影响
2.2.2 不同超声波功率对花粉的影响
2.2.3 卡那霉素筛选
2.2.4 转基因种子的筛选以及PCR检测
2.3 讨论与结论
第三章 基于真空渗入法的转基因大白菜植株的获得
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 转基因植株的获得以及PCR检测
3.2.2 转基因植株的VPE基因表达分析
3.3 结论与讨论
第四章 结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化[J]. 霍琳,及晓宇,王玉成. 分子植物育种. 2016(01)
[2]普通白菜转基因选择剂的浓度筛选[J]. 齐仙惠,付超,宋红霞,侯雷平,孙梦霞,李梅兰. 山西农业科学. 2014(08)
[3]小麦非组织培养转基因技术研究及展望[J]. 黄国中,丁博,王俊斌,李明,陈帅君,郭瑶琳,程乔林,张卫国,谢晓东. 分子植物育种. 2014(04)
[4]转基因技术及在大豆中的应用研究[J]. 郝东旭,胡景辉. 华北农学报. 2013(S1)
[5]基因枪法转化大豆未成熟子叶影响因素的研究[J]. 王萍,李倩,王罡,冯远航,季静,王恩旭,邱丽娟. 大豆科学. 2013(06)
[6]基因枪法介导的转KN2基因小麦的获得及鉴定[J]. 周鹏,池青,吕金洋,刘香利,赵惠贤. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(01)
[7]花龄对白菜花粉活力的影响[J]. 付超,贾彩云,宋红霞. 黑龙江农业科学. 2013(11)
[8]超声波处理花粉介导‘黄花’梨遗传转化体系的建立[J]. 马倩倩,宋跃,孙毅,张绍铃,崔贵梅,吴俊. 果树学报. 2013(04)
[9]普通白菜遗传转化研究进展[J]. 陈泠先,崔丽洁,钱忠英,潘静娴,开国银. 中国蔬菜. 2012(24)
[10]大豆子叶节对卡那霉素的敏感性研究[J]. 张春涛,朱洪德,殷奎德. 安徽农业科学. 2012(23)
博士论文
[1]利用真空渗入法获得转基因抗虫白菜及其转化机理的研究[D]. 徐恒戬.山东农业大学 2004
硕士论文
[1]农杆菌介导的白菜高效遗传转化体系研究[D]. 贾艳丽.中国农业科学院 2014
[2]大白菜离体再生体系的建立及遗传转化[D]. 茹磊.西北农林科技大学 2011
[3]农杆菌真空渗透转化棉花的研究及转SuSy基因棉花后代的功能验证[D]. 张燕红.新疆农业大学 2008
[4]芥菜（Brassica juncea Coss）植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D]. 金万梅.西北农林科技大学 2001
本文编号：3331270
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 DNA直接导入法
1.2 农杆菌介导法
1.2.1 农杆菌介导的叶盘转化法
1.2.2 农杆菌介导的原位转化法
1.3 本研究的目的与意义
第二章 大白菜花粉介导转基因的几个因素优化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 不同蔗糖浓度花粉悬浮液对花粉形态的影响
2.2.2 不同超声波功率对花粉的影响
2.2.3 卡那霉素筛选
2.2.4 转基因种子的筛选以及PCR检测
2.3 讨论与结论
第三章 基于真空渗入法的转基因大白菜植株的获得
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 转基因植株的获得以及PCR检测
3.2.2 转基因植株的VPE基因表达分析
3.3 结论与讨论
第四章 结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化[J]. 霍琳,及晓宇,王玉成. 分子植物育种. 2016(01)
[2]普通白菜转基因选择剂的浓度筛选[J]. 齐仙惠,付超,宋红霞,侯雷平,孙梦霞,李梅兰. 山西农业科学. 2014(08)
[3]小麦非组织培养转基因技术研究及展望[J]. 黄国中,丁博,王俊斌,李明,陈帅君,郭瑶琳,程乔林,张卫国,谢晓东. 分子植物育种. 2014(04)
[4]转基因技术及在大豆中的应用研究[J]. 郝东旭,胡景辉. 华北农学报. 2013(S1)
[5]基因枪法转化大豆未成熟子叶影响因素的研究[J]. 王萍,李倩,王罡,冯远航,季静,王恩旭,邱丽娟. 大豆科学. 2013(06)
[6]基因枪法介导的转KN2基因小麦的获得及鉴定[J]. 周鹏,池青,吕金洋,刘香利,赵惠贤. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(01)
[7]花龄对白菜花粉活力的影响[J]. 付超,贾彩云,宋红霞. 黑龙江农业科学. 2013(11)
[8]超声波处理花粉介导‘黄花’梨遗传转化体系的建立[J]. 马倩倩,宋跃,孙毅,张绍铃,崔贵梅,吴俊. 果树学报. 2013(04)
[9]普通白菜遗传转化研究进展[J]. 陈泠先,崔丽洁,钱忠英,潘静娴,开国银. 中国蔬菜. 2012(24)
[10]大豆子叶节对卡那霉素的敏感性研究[J]. 张春涛,朱洪德,殷奎德. 安徽农业科学. 2012(23)
博士论文
[1]利用真空渗入法获得转基因抗虫白菜及其转化机理的研究[D]. 徐恒戬.山东农业大学 2004
硕士论文
[1]农杆菌介导的白菜高效遗传转化体系研究[D]. 贾艳丽.中国农业科学院 2014
[2]大白菜离体再生体系的建立及遗传转化[D]. 茹磊.西北农林科技大学 2011
[3]农杆菌真空渗透转化棉花的研究及转SuSy基因棉花后代的功能验证[D]. 张燕红.新疆农业大学 2008
[4]芥菜（Brassica juncea Coss）植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D]. 金万梅.西北农林科技大学 2001
本文编号：3331270
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/yylw/3331270.html
