内生真菌与葡萄细胞离体共培养体系的构建及其代谢互作
发布时间：2021-11-03 01:01
内生真菌能够通过多种方式影响植物的生长和发育,也能影响植物的代谢过程进而调控植物细胞的代谢产物状态。而在细胞层次上内生菌是否依然具有调控植物细胞次生代谢的效应以及其作用机制并不完全清楚。本研究以从玫瑰蜜和赤霞珠植株中分离得到的8属21株内生真菌以及赤霞珠愈伤组织细胞为研究材料,设计实验研究了内生真菌与赤霞珠愈伤组织细胞共培养的技术方法,并探讨了共培养过程中内生真菌与葡萄愈伤组织细胞在生理生化层面的相互作用,重点研究了内生真菌对葡萄细胞次生代谢的调控作用,得到以下结果：1.以葡萄愈伤组织培养基为基础,通过对峙培养法和设置双对照构建了葡萄愈伤组织细胞与内生真菌的共培养方法体系。该体系可以有效用于葡萄愈伤组织细胞和内生真菌在形态和生理生化层次上的相互作用研究模型。2.研究了不同内生真菌与葡萄愈伤组织共培养对两者生长速率和细胞活性的影响发现,与内生真菌共培养均会一定程度抑制愈伤组织的生长和降低细胞的活性,不过抑制的程度不同。菌株RH-16对愈伤组织增长抑制作用最小,抑制率15%。而RH-38对愈伤的增长抑制最大,抑制率达78%。对细胞活性和褐化影响最严重的为RH-16,影响最小的为RH-12。...
【文章来源】：云南大学云南省 211工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 葡萄与酿酒葡萄研究简介
1.1.1 葡萄属分类及分布
1.1.2 葡萄的经济意义
1.1.3 葡萄品种及在我国的发展历程
1.2 植物内生真菌研究概况
1.2.1 植物内生真菌的定义及种类
1.2.2 内生真菌与植物的在代谢上的相互作用
1.2.3 植物内生真菌的应用
1.2.4 葡萄内生真菌的研究现状
1.3 植物次生代谢产物研究概况
1.3.1 植物次生代谢合成途径
1.3.2 黄酮类化合物的研究进展
1.3.2.1 黄酮类化合物的定义及分类
1.3.2.2 黄酮类化合物的合成及其调控
1.3.2.3 黄酮类化合物的生物活性
1.3.3 葡萄酒中酚类和黄酮类物质及其作用
1.4 本论文的研究目的和意义
第二章 内生真菌与葡萄细胞共培养体系的构建
2.1. 材料
2.2 实验方法
2.2.1 赤霞珠愈伤组织的培养及继代
2.2.2 内生真菌的培养
2.2.3 内生真菌与葡萄愈伤组织的共培养体系构建
2.2.4 内生真菌与愈伤组织共培养生长状况观测
2.2.5 真菌生长速率测定
2.2.6 愈伤组织增长速率的测定
2.2.7 愈伤组织细胞活性的测定
2.3 结果与分析
2.3.1 不同内生真菌与葡萄共培养细胞接触情况与褐化情况分析
2.3.2 与葡萄愈伤组织共培养对不同内生真菌生长的影响
2.3.3 与不同内生真菌共培养对葡萄愈伤组织细胞增殖的影响
2.3.4 与不同内生真菌共培养对葡萄愈伤组织细胞活性的影响
2.3.5 不同内生真菌与愈伤组织共培养中各生理指标间的相关性分析
2.4 结论与讨论
第三章 葡萄细胞对共培养内生真菌的代谢响应
3.1 实验材料
3.2 方法
3.2.1. 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
3.2.2 过氧化物酶(POD)活性测定
3.2.3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定
3.2.4 丙二醛(MDA)含量测定
3.2.5. 总蛋白质(TPr)含量测定
3.2.6. 总酚(TPh)含量测定
3.2.7 可滴定总酸(TTA)的测定
3.2.8 可溶性总糖(TS)含量的测定
3.2.9 总黄酮(TF)含量的测定
3.2.10 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞酚类物质的影响
3.2.10.1 酚类物质的萃取
3.2.10.2 高效液相色谱条件的选择
3.3 结果与分析
3.3.1 与不同内生真菌共培养对愈伤组织生理指标的影响
3.3.1.1 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞SOD活性的影响
3.3.1.2 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞POD活性的影响
3.3.1.3 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞PAL活性的影响
3.3.1.4 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞MDA含量的影响
3.3.2 与不同内生真菌共培养对愈伤组织生化指标的影响
3.3.2.1 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总黄酮(TF)含量的影响
3.3.2.2 不同内生真菌对共培养的葡萄细胞总蛋白(TPr)含量的影响
3.3.2.3 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总酚(TPh)含量的影响
3.3.2.4 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总可溶性糖(TS)含量的影响
3.3.2.5 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总可滴定酸(TTA)的影响
3.3.3 与不同内生真菌共培养后葡萄细胞各生理生化指标的相关性分析
3.3.4 不同内生真菌对共培养葡萄细胞生理生化指标影响程度分析
3.3.5 共培养愈伤组织及菌的生长状况与细胞生理生化指标的相关性分析
3.3.6 基于细胞生理生化响应对不同内生真菌进行分类
3.3.7 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类物质代谢的影响
3.3.7.1 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类物质种类的影响
3.3.7.2 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类化合物相对含量的影响
3.3.7.3 对细胞活性影响较小的菌株对葡萄细胞酚类物质代谢的影响
3.3.7.4 共培养体系细胞和内生真菌生长状态及细胞生化指标与细胞献类物质种类
3.4 结论与讨论
第四章 总结与展望
4.1 主要结论
4.1.1 构建了葡萄愈伤组织细胞与内生真菌共培养的体系模型
4.1.2 共培养体系中不同内生真菌的和愈伤组织的生长状况会相互影响
4.1.3 与不同内生真菌共培养能够显著改变葡萄细胞生理生化指标和代谢途径
4.1.4 筛选出对葡萄细胞生理生化影响较大的菌株
4.1.5 与不同内生真菌的共培养可能改变细胞的次生代谢途径
4.2 展望
参考文献
附录
硕士期间参与项目及发表论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]晚熟酿酒葡萄新品种‘新北醇’[J]. 范培格,王利军,吴本宏,段伟,杨美容,黎盛臣,梁振昌,辛海平,匡阳甫,郭鋆鋆,廖宣峰,李前隽,李绍华. 果农之友. 2016(01)
[2]蜂胶黄酮对炎症反应单核细胞中NLRP3炎性小体活性的影响[J]. 张晓晖,曾伟,陈鹏,姚树桐. 山东医药. 2015(39)
[3]三种黄酮清除自由基活性的研究[J]. 邹淑君,许树军,付起风,徐暘. 化学工程师. 2015(05)
[4]真菌诱导子对毛葡萄愈伤组织细胞次生代谢的影响[J]. 宁进,张秀英,程玉,黄治钰,杨明挚. 中国南方果树. 2015(02)
[5]回接内生真菌对玫瑰蜜葡萄生长及果实外观品质的影响初报[J]. 黄治钰,王馨蕊,黄丽华,袁明全,刘加强,张汉波,杨明挚. 中外葡萄与葡萄酒. 2015(02)
[6]山葡萄综合开发利用研究进展[J]. 崔长伟,刘丽媛,王华,李华,马彤彤. 食品科学. 2015(13)
[7]烟台地区葡萄根部内生真菌多样性研究[J]. 王朝霞,程显好,李维焕,刘凤红,王臣君,李坤,孙磊. 中外葡萄与葡萄酒. 2014(06)
[8]再接种内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响[J]. 马勉娣,张秀英,程玉,黄治钰,张汉波,杨明挚. 微生物学通报. 2014(12)
[9]酿酒葡萄“赤霞珠”叶内生真菌多样性研究[J]. 马勉娣,黄治钰,张秀英,赵新节,张汉波,刘加强,杨明挚. 中国南方果树. 2014(03)
[10]不同氮素水平下内生真菌印度梨形孢定殖对烟草生长发育及物质代谢的影响[J]. 王衬,毛黎娟,惠非琼,章初龙,楼兵干,林福呈,刘萍萍,陈霞,周会娜. 烟草科技. 2014(05)
博士论文
[1]委陵菜黄酮衍生物抗糖尿病活性及其作用机制研究[D]. 周雯.天津医科大学 2013
[2]两种金线莲生长及与内生真菌共生培养的研究[D]. 赵玥.北京协和医学院 2009
硕士论文
[1]酿酒葡萄细胞对三株内生真菌诱导子的生理生化响应[D]. 张秀英.云南大学 2015
[2]茶树内生真菌与宿主植物相互作用的初步研究[D]. 武汉琴.福建师范大学 2009
[3]薯蓣内生真菌生物活性及其与宿主细胞共培养的初步研究[D]. 周生亮.南京师范大学 2005
[4]盾叶薯蓣细胞及内生真菌共培养机制研究[D]. 李文谦.南京工业大学 2004
本文编号：3472725
【文章来源】：云南大学云南省 211工程院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 葡萄与酿酒葡萄研究简介
1.1.1 葡萄属分类及分布
1.1.2 葡萄的经济意义
1.1.3 葡萄品种及在我国的发展历程
1.2 植物内生真菌研究概况
1.2.1 植物内生真菌的定义及种类
1.2.2 内生真菌与植物的在代谢上的相互作用
1.2.3 植物内生真菌的应用
1.2.4 葡萄内生真菌的研究现状
1.3 植物次生代谢产物研究概况
1.3.1 植物次生代谢合成途径
1.3.2 黄酮类化合物的研究进展
1.3.2.1 黄酮类化合物的定义及分类
1.3.2.2 黄酮类化合物的合成及其调控
1.3.2.3 黄酮类化合物的生物活性
1.3.3 葡萄酒中酚类和黄酮类物质及其作用
1.4 本论文的研究目的和意义
第二章 内生真菌与葡萄细胞共培养体系的构建
2.1. 材料
2.2 实验方法
2.2.1 赤霞珠愈伤组织的培养及继代
2.2.2 内生真菌的培养
2.2.3 内生真菌与葡萄愈伤组织的共培养体系构建
2.2.4 内生真菌与愈伤组织共培养生长状况观测
2.2.5 真菌生长速率测定
2.2.6 愈伤组织增长速率的测定
2.2.7 愈伤组织细胞活性的测定
2.3 结果与分析
2.3.1 不同内生真菌与葡萄共培养细胞接触情况与褐化情况分析
2.3.2 与葡萄愈伤组织共培养对不同内生真菌生长的影响
2.3.3 与不同内生真菌共培养对葡萄愈伤组织细胞增殖的影响
2.3.4 与不同内生真菌共培养对葡萄愈伤组织细胞活性的影响
2.3.5 不同内生真菌与愈伤组织共培养中各生理指标间的相关性分析
2.4 结论与讨论
第三章 葡萄细胞对共培养内生真菌的代谢响应
3.1 实验材料
3.2 方法
3.2.1. 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
3.2.2 过氧化物酶(POD)活性测定
3.2.3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定
3.2.4 丙二醛(MDA)含量测定
3.2.5. 总蛋白质(TPr)含量测定
3.2.6. 总酚(TPh)含量测定
3.2.7 可滴定总酸(TTA)的测定
3.2.8 可溶性总糖(TS)含量的测定
3.2.9 总黄酮(TF)含量的测定
3.2.10 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞酚类物质的影响
3.2.10.1 酚类物质的萃取
3.2.10.2 高效液相色谱条件的选择
3.3 结果与分析
3.3.1 与不同内生真菌共培养对愈伤组织生理指标的影响
3.3.1.1 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞SOD活性的影响
3.3.1.2 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞POD活性的影响
3.3.1.3 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞PAL活性的影响
3.3.1.4 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞MDA含量的影响
3.3.2 与不同内生真菌共培养对愈伤组织生化指标的影响
3.3.2.1 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总黄酮(TF)含量的影响
3.3.2.2 不同内生真菌对共培养的葡萄细胞总蛋白(TPr)含量的影响
3.3.2.3 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总酚(TPh)含量的影响
3.3.2.4 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总可溶性糖(TS)含量的影响
3.3.2.5 与不同内生真菌共培养对葡萄细胞总可滴定酸(TTA)的影响
3.3.3 与不同内生真菌共培养后葡萄细胞各生理生化指标的相关性分析
3.3.4 不同内生真菌对共培养葡萄细胞生理生化指标影响程度分析
3.3.5 共培养愈伤组织及菌的生长状况与细胞生理生化指标的相关性分析
3.3.6 基于细胞生理生化响应对不同内生真菌进行分类
3.3.7 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类物质代谢的影响
3.3.7.1 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类物质种类的影响
3.3.7.2 不同内生真菌对共培养葡萄细胞酚类化合物相对含量的影响
3.3.7.3 对细胞活性影响较小的菌株对葡萄细胞酚类物质代谢的影响
3.3.7.4 共培养体系细胞和内生真菌生长状态及细胞生化指标与细胞献类物质种类
3.4 结论与讨论
第四章 总结与展望
4.1 主要结论
4.1.1 构建了葡萄愈伤组织细胞与内生真菌共培养的体系模型
4.1.2 共培养体系中不同内生真菌的和愈伤组织的生长状况会相互影响
4.1.3 与不同内生真菌共培养能够显著改变葡萄细胞生理生化指标和代谢途径
4.1.4 筛选出对葡萄细胞生理生化影响较大的菌株
4.1.5 与不同内生真菌的共培养可能改变细胞的次生代谢途径
4.2 展望
参考文献
附录
硕士期间参与项目及发表论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]晚熟酿酒葡萄新品种‘新北醇’[J]. 范培格,王利军,吴本宏,段伟,杨美容,黎盛臣,梁振昌,辛海平,匡阳甫,郭鋆鋆,廖宣峰,李前隽,李绍华. 果农之友. 2016(01)
[2]蜂胶黄酮对炎症反应单核细胞中NLRP3炎性小体活性的影响[J]. 张晓晖,曾伟,陈鹏,姚树桐. 山东医药. 2015(39)
[3]三种黄酮清除自由基活性的研究[J]. 邹淑君,许树军,付起风,徐暘. 化学工程师. 2015(05)
[4]真菌诱导子对毛葡萄愈伤组织细胞次生代谢的影响[J]. 宁进,张秀英,程玉,黄治钰,杨明挚. 中国南方果树. 2015(02)
[5]回接内生真菌对玫瑰蜜葡萄生长及果实外观品质的影响初报[J]. 黄治钰,王馨蕊,黄丽华,袁明全,刘加强,张汉波,杨明挚. 中外葡萄与葡萄酒. 2015(02)
[6]山葡萄综合开发利用研究进展[J]. 崔长伟,刘丽媛,王华,李华,马彤彤. 食品科学. 2015(13)
[7]烟台地区葡萄根部内生真菌多样性研究[J]. 王朝霞,程显好,李维焕,刘凤红,王臣君,李坤,孙磊. 中外葡萄与葡萄酒. 2014(06)
[8]再接种内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响[J]. 马勉娣,张秀英,程玉,黄治钰,张汉波,杨明挚. 微生物学通报. 2014(12)
[9]酿酒葡萄“赤霞珠”叶内生真菌多样性研究[J]. 马勉娣,黄治钰,张秀英,赵新节,张汉波,刘加强,杨明挚. 中国南方果树. 2014(03)
[10]不同氮素水平下内生真菌印度梨形孢定殖对烟草生长发育及物质代谢的影响[J]. 王衬,毛黎娟,惠非琼,章初龙,楼兵干,林福呈,刘萍萍,陈霞,周会娜. 烟草科技. 2014(05)
博士论文
[1]委陵菜黄酮衍生物抗糖尿病活性及其作用机制研究[D]. 周雯.天津医科大学 2013
[2]两种金线莲生长及与内生真菌共生培养的研究[D]. 赵玥.北京协和医学院 2009
硕士论文
[1]酿酒葡萄细胞对三株内生真菌诱导子的生理生化响应[D]. 张秀英.云南大学 2015
[2]茶树内生真菌与宿主植物相互作用的初步研究[D]. 武汉琴.福建师范大学 2009
[3]薯蓣内生真菌生物活性及其与宿主细胞共培养的初步研究[D]. 周生亮.南京师范大学 2005
[4]盾叶薯蓣细胞及内生真菌共培养机制研究[D]. 李文谦.南京工业大学 2004
本文编号：3472725
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