草莓镶脉病毒侵染性克隆鉴定及其反式激活因子功能分析

发布时间：2022-04-17 20:08

　　草莓镶脉病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）中国分离物侵染性克隆pSVBV-SY可以侵染森林草莓,但是叶片划伤接种侵染率较低,阻碍了侵染性克隆的研究。为了改进接种方法,本研究利用农杆菌真空抽滤法接种草莓,可显著提高接种效率,pSVBV-SY在森林草莓上实现高效侵染且表现出典型镶脉症状。SVBV病毒载体pSVBV-MCS同法接种森林草莓,可验证其侵染性。已有研究发现花椰菜花叶病毒科病毒P6蛋白能够反式激活多顺反子mRNA的翻译,本研究鉴定SVBV P6蛋白是病毒的翻译反式激活因子（transactivator）,能够高效激活人工构建双顺反子第2个基因的表达。预测反式激活因子P6功能域,构建系列P6突变体,发现P6各突变体均不能反式激活双顺反子第2个基因的表达。1 SVBV侵染性克隆的侵染性鉴定和检测比较划伤接种法和真空抽滤法接种草莓的接种效率,SVBV沈阳分离物侵染性克隆pSVBV-SY接种森林草莓,均接种15株,35d后检测侵染率,划伤接种侵染率仅在20%-40%之间,真空抽滤法接种侵染率在86%-100%之间。显症植株PCR均能够检测到pSVB... 

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
ABSTRACT
文献综述
    1 草莓镶脉病毒
        1.1 草莓镶脉病毒的分类及其主要特性
        1.2 草莓镶脉病毒基因组结构及其编码的蛋白及功能
    2 植物病毒侵染性克隆与病毒载体
        2.1 植物病毒侵染性克隆
        2.2 植物病毒载体
        2.3 植物病毒侵染性克隆接种方法
    3 真核细胞基因翻译再起始
        3.1 真核细胞基因翻译再起始概述
        3.2 CaMV病毒反式激活因子的研究进展
            3.2.1 反式激活因子简介
            3.2.2 CaMV反式激活因子TAV,调控多顺反子mRNA的翻译
            3.2.3 TAV与寄主体内翻译因子的互作研究
引言
材料与方法
    1 材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株、质粒和载体
        1.3 酶和常用试剂
        1.4 常用缓冲溶液
        1.5 常用实验仪器
    2 方法
        2.1 草莓叶片总DNA的提取
            2.1.1 CTAB抽提液配制
            2.1.2 CTAB法提取草莓叶片总DNA操作步骤
        2.2 总RNA的提取
        2.3 PCR技术
            2.3.1 Taq酶反应体系配制
            2.3.2 Taq酶反应程序设置
        2.4 基因的克隆步骤
            2.4.1 高保真酶PCR扩增
            2.4.2 高保真酶PCR扩增反应程序设置
            2.4.3 PCR产物生成粘性末端
            2.4.4 DNA产物的连接
            2.4.5 大肠杆菌感受态细胞的制备
            2.4.6 农杆菌感受态细胞的制备
            2.4.7 质粒提取
        2.5 农杆菌接种
            2.5.1 农杆菌浸润本氏烟
            2.5.2 SVBV侵染性克隆接种森林草莓
        2.6 双顺反子的克隆构建
            2.6.1 引物设计
            2.6.2 双顺反子的克隆
        2.7 植物蛋白提取
结果与分析
    1 SVBV侵染性克隆的侵染性鉴定和检测
        1.1 SVBV侵染性克隆真空抽滤法接种草莓
        1.2 SVBV沈阳分离物侵染性克隆具有侵染性
        1.3 SVBV沈阳分离物侵染性克隆接种森林草莓的检测
    2 SVBV病毒载体的侵染性鉴定
        2.1 SVBV病毒载体具有侵染性
    3 SVBV病毒侵染性克隆能够反式激活双顺反子表达
        3.1 SVBV病毒侵染性克隆能够反式激活CaMV双顺反子表达
    4 SVBV病毒反式激活因子的鉴定
        4.1 除P6外病毒其他各ORF蛋白均不能反式激活双顺反子表达
        4.2 P6蛋白能够反式激活不同病毒来源双顺反子表达
    5 P6蛋白反式激活功能域的探究
        5.1 P6蛋白各个突变体均不能反式激活双顺反子表达
讨论
    1 SVBV病毒侵染性克隆的接种方法
    2 SVBV病毒载体的构建
    3 P6反式激活功能域的研究
    4 P6对反式激活翻译过程的调控机制
结论
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]ICTV第九次报告以来的植物病毒分类系统[J]. 洪健,周雪平.  植物病理学报. 2014(06)
[2]草莓镶脉病毒研究进展[J]. 肖敏,张志宏.  辽宁农业科学. 2005(04)
[3]草莓病毒病研究进展[J]. 周厚成,何水涛.  果树学报. 2003(05)
[4]正链RNA病毒基因组感染性克隆研究进展[J]. 吴海祥,张楚瑜.  武汉大学学报(理学版). 2002(04)
[5]乙型肝炎病毒蛋白反式激活基因的研究[J]. 刘妍,成军,陆荫英,李克.  世界华人消化杂志. 2002(02)
[6]草莓病毒种类鉴定及培育无病毒种苗的技术研究[J]. 王国平,刘福昌,薛光荣,朱秋英,杨振英,王焕玉.  中国农业科学. 1990(04)

硕士论文
[1]草莓镶脉病毒抑制沉默机制及其中国分离物侵染性鉴定[D]. 张汉平.安徽农业大学 2015



本文编号：3646186