中国水仙花类黄酮合成途径研究
发布时间：2022-07-03 20:14
为探明中国水仙花（Narcissus tazetta var.Cihensis Roem）类黄酮物质组分与代谢机制,本研究以中国水仙花不同发育阶段的花瓣和副冠为材料,利用非酸水解法提取类黄酮物质,结合HPLC-MSn技术,对不同发育时期的中国水仙花类黄酮物质进行定性定量分析,同时采用表达谱分析和荧光定量PCR分析,对其类黄酮合成途径进行研究,得到的主要结果如下:1建立了中国水仙花类黄酮物质提取与鉴定技术以中国水仙三年生种球盛花期花瓣为材料,比较非酸水解法和酸水解法提取得到的类黄酮物质,并用高效液相色谱与多级质谱联用（HPLC-MSn）技术进行鉴定,比较了两种提取方法的优缺点、筛选了 HPLC-MSn的流动相体系。结果表明,在同一 HPLC-MSn流动相体系及梯度洗脱条件下酸水解法提取鉴定得到了绿原酸、槲皮素和异鼠李素;非酸水解法提取鉴定得到了绿原酸、芦丁和水仙苷。槲皮素和异鼠李素分别是芦丁和水仙苷的苷元,鉴于非酸水解法提取得到的黄酮苷经HPLC-MSm技术鉴定能提供更丰富的结构信息（糖苷键结合位置、糖苷种类）,所以选择非酸解法为后续试验的提取方法。比较了 1%乙酸-甲醇和1%乙酸-乙睛...
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
1 中国水仙概况
1.1 中国水仙起源与分布
1.2 中国水仙繁殖方式
2 花色形成机理
2.1 类胡萝卜素与花色形成的关系
2.2 类黄酮与花色形成的关系
3 类黄酮提取与鉴定方法
4 本试验的研究目的及意义
第二章 HPLC-MS~n技术鉴定中国水仙花类黄酮成分
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 中国水仙类黄酮成分提取方法的比较
1.2.2 HPLC-MS~n检测条件的建立
2 结果与分析
2.1 中国水仙类黄酮成分提取方法的比较
2.2 中国水仙类黄酮HPLC-MS~n鉴定方法的比较
3 讨论
3.1 不同提取方法中中国水仙花瓣类黄酮成分的差异
3.2 HPLC-MS~n结合ESI和DAD技术在定性苷类物质有独特的优势
3.3 1%乙酸-乙腈是适合中国水仙花瓣类黄酮成分提取的HPLC-MS~n流动相体系
第三章 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质含量的变化
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 线性回归方程及相关参数
2.2 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质HPLC-MS~n总离子图及物质鉴定
2.3 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质含量变化
3 讨论
3.1 中国水仙花发育过程中黄酮醇物质的合成与积累
3.2 芦丁可能通过甲基化形成结构更稳定的水仙苷
第四章 中国水仙花发育过程的表达谱分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 RNA提取与检测
1.2.2 中国水仙花发育过程的表达谱测序
2 结果与分析
2.1 总RNA质量检测
2.2 测序数据统计与评估
2.2.1 测序质量值分布检查
2.2.2 测序产出统计
2.3 RNA-Seq整体质量评估
2.3.1 与参考基因组比对统计
2.3.2 cDNA片段随机性检验
2.2.3 测序饱和度检验
2.4 中国水仙花色发育类黄酮合成途径差异表达基因筛选
2.4.1 佛焰总苞中期与其它时期各组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.2 相同时期不同组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.3 不同时期相同组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.2 中国水仙花色发育黄酮与黄酮醇生物合成途径中差异表达基因筛选
2.4.2.1 佛焰总苞中期与其它时期各组织黄酮与黄酮醇生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.2 相同时期不同组织黄酮与黄酮醇生物合成途径差异基因的筛选
3 讨论
第五章 中国水仙类黄酮合成途径相关基因的表达研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 RNA提取与检测
1.2.2 cDNA合成
1.2.3 qPCR引物设计
1.2.4 两步法qPCR
1.2.5 数据分析及作图
2 结果与分析
2.1 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花花瓣发育不同时期的表达情况
2.2 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花副冠不同发育时期的表达情况
2.3 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花佛焰总苞中期雄蕊、花瓣的表达情况
2.4 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花绿苞期花瓣、副冠的表达情况
2.5 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花盛花期花瓣、副冠的表达情况
3 讨论
第六章 总结与展望
1 结论
2 展望
附录1
附录2
附录3 不同发育进程的中国水仙花
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]NtC3H基因对烟草类黄酮及绿原酸合成的影响[J]. 李洋,唐雪冰,李晓峰,李明,储昭辉,丁新华. 中国烟草科学. 2016(01)
[2]芦丁的电喷雾离子阱质谱分析[J]. 李自红,魏悦,范毅,朱杰,赵天增. 分析试验室. 2015(02)
[3]纯橙汁中类黄酮的RP-HPLC-DAD-ESI-MS~2分离鉴定[J]. 蔡欣,李宝丽,玉佳男,刘睿,周胜银,王红,李涛. 核农学报. 2014(12)
[4]植物甜菜色素的研究进展[J]. 黄欢,胡慧霞,姜联合,王亮生,任红旭. 生物学通报. 2014(08)
[5]基于数字表达谱对茶树类黄酮合成、调控相关基因表达的研究[J]. 韦康,王丽鸳,成浩,张丽群,冯素花. 茶叶科学. 2014(02)
[6]水仙红色副冠形成机理的初步研究[J]. 郑益平,吴雪琴,曾黎辉. 园艺学报. 2013(12)
[7]红肉火龙果果皮色素的分离、纯化和HPLC-MS分析[J]. 袁亚芳,赵珍珍,王威,陈清西,余志雄. 福建农林大学学报(自然科学版). 2013(06)
[8]多花水仙花期类胡萝卜素物质和类黄酮物质的含量变化[J]. 何炎森,杨碧云,李科,陈晓静. 热带作物学报. 2013(03)
[9]植物类黄酮O-甲基转移酶研究进展[J]. 张传丽,仲月明,沈丹红,陈鹏. 西北植物学报. 2012(06)
[10]漳州水仙花瓣和副冠类胡萝卜素成分分析及合成途径基因表达研究[J]. 曾原飞,张慧平,温超,曾黎辉. 热带作物学报. 2012(04)
博士论文
[1]何首乌中二苯乙烯苷生物合成相关基因的筛选与分析[D]. 赵炜.华南理工大学 2014
[2]葡萄风信子（Muscari）花色形成与相关基因研究[D]. 娄倩.西北农林科技大学 2014
[3]多花水仙花色相关基因的分离及功能分析[D]. 何炎森.福建农林大学 2013
[4]越橘果实转录组文库Solexa测序及花色素苷合成相关基因的表达分析[D]. 李晓艳.吉林农业大学 2012
[5]榛子花芽转录组文库的Solexa测序及冷调节基因的表达谱分析[D]. 陈新.中国林业科学研究院 2011
[6]金柑等柑橘类果实黄酮类化合物提取、纯化及分离鉴定[D]. 陈源.福建农林大学 2011
硕士论文
[1]‘平潭水仙’β-葡萄糖苷酶与挥发性芳香物质形成关系的研究[D]. 钟娴.福建农林大学 2014
[2]漳州水仙鳞茎盘转录组分析及类黄酮合成途径基因的表达[D]. 罗鹏.福建农林大学 2014
[3]不同花生品种类黄酮积累及其合成酶活性对干旱胁迫的响应[D]. 孙利.山东农业大学 2013
[4]无花果叶类黄酮提取、纯化、鉴定及抗氧化研究[D]. 吴子江.福建农林大学 2013
[5]水仙类胡萝卜素合成途径基因的表达及花色相关基因克隆[D]. 郑益平.福建农林大学 2013
[6]花瓣花色苷分离纯化技术及杂交后代花色苷遗传分析研究[D]. 陈越.宁波大学 2012
[7]观赏海棠花青素代谢途径与产物的研究[D]. 耿健.西南大学 2011
[8]洋葱类黄酮的提取及生物活性研究[D]. 郭詹菁.福建农林大学 2010
[9]中国水仙遗传转化及花色素成分分析[D]. 张慧平.福建农林大学 2010
[10]液—质联用法检测乳品中六种聚醚类抗生素的残留[D]. 雒丽丽.甘肃农业大学 2009
本文编号：3655573
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
1 中国水仙概况
1.1 中国水仙起源与分布
1.2 中国水仙繁殖方式
2 花色形成机理
2.1 类胡萝卜素与花色形成的关系
2.2 类黄酮与花色形成的关系
3 类黄酮提取与鉴定方法
4 本试验的研究目的及意义
第二章 HPLC-MS~n技术鉴定中国水仙花类黄酮成分
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 中国水仙类黄酮成分提取方法的比较
1.2.2 HPLC-MS~n检测条件的建立
2 结果与分析
2.1 中国水仙类黄酮成分提取方法的比较
2.2 中国水仙类黄酮HPLC-MS~n鉴定方法的比较
3 讨论
3.1 不同提取方法中中国水仙花瓣类黄酮成分的差异
3.2 HPLC-MS~n结合ESI和DAD技术在定性苷类物质有独特的优势
3.3 1%乙酸-乙腈是适合中国水仙花瓣类黄酮成分提取的HPLC-MS~n流动相体系
第三章 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质含量的变化
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 线性回归方程及相关参数
2.2 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质HPLC-MS~n总离子图及物质鉴定
2.3 不同时期中国水仙花类黄酮、酚酸物质含量变化
3 讨论
3.1 中国水仙花发育过程中黄酮醇物质的合成与积累
3.2 芦丁可能通过甲基化形成结构更稳定的水仙苷
第四章 中国水仙花发育过程的表达谱分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 RNA提取与检测
1.2.2 中国水仙花发育过程的表达谱测序
2 结果与分析
2.1 总RNA质量检测
2.2 测序数据统计与评估
2.2.1 测序质量值分布检查
2.2.2 测序产出统计
2.3 RNA-Seq整体质量评估
2.3.1 与参考基因组比对统计
2.3.2 cDNA片段随机性检验
2.2.3 测序饱和度检验
2.4 中国水仙花色发育类黄酮合成途径差异表达基因筛选
2.4.1 佛焰总苞中期与其它时期各组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.2 相同时期不同组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.3 不同时期相同组织类黄酮生物合成途径差异基因的筛选
2.4.2 中国水仙花色发育黄酮与黄酮醇生物合成途径中差异表达基因筛选
2.4.2.1 佛焰总苞中期与其它时期各组织黄酮与黄酮醇生物合成途径差异基因的筛选
2.4.1.2 相同时期不同组织黄酮与黄酮醇生物合成途径差异基因的筛选
3 讨论
第五章 中国水仙类黄酮合成途径相关基因的表达研究
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 试验仪器
1.2 方法
1.2.1 RNA提取与检测
1.2.2 cDNA合成
1.2.3 qPCR引物设计
1.2.4 两步法qPCR
1.2.5 数据分析及作图
2 结果与分析
2.1 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花花瓣发育不同时期的表达情况
2.2 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花副冠不同发育时期的表达情况
2.3 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花佛焰总苞中期雄蕊、花瓣的表达情况
2.4 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花绿苞期花瓣、副冠的表达情况
2.5 类黄酮合成途径中差异基因在中国水仙花盛花期花瓣、副冠的表达情况
3 讨论
第六章 总结与展望
1 结论
2 展望
附录1
附录2
附录3 不同发育进程的中国水仙花
致谢
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]NtC3H基因对烟草类黄酮及绿原酸合成的影响[J]. 李洋,唐雪冰,李晓峰,李明,储昭辉,丁新华. 中国烟草科学. 2016(01)
[2]芦丁的电喷雾离子阱质谱分析[J]. 李自红,魏悦,范毅,朱杰,赵天增. 分析试验室. 2015(02)
[3]纯橙汁中类黄酮的RP-HPLC-DAD-ESI-MS~2分离鉴定[J]. 蔡欣,李宝丽,玉佳男,刘睿,周胜银,王红,李涛. 核农学报. 2014(12)
[4]植物甜菜色素的研究进展[J]. 黄欢,胡慧霞,姜联合,王亮生,任红旭. 生物学通报. 2014(08)
[5]基于数字表达谱对茶树类黄酮合成、调控相关基因表达的研究[J]. 韦康,王丽鸳,成浩,张丽群,冯素花. 茶叶科学. 2014(02)
[6]水仙红色副冠形成机理的初步研究[J]. 郑益平,吴雪琴,曾黎辉. 园艺学报. 2013(12)
[7]红肉火龙果果皮色素的分离、纯化和HPLC-MS分析[J]. 袁亚芳,赵珍珍,王威,陈清西,余志雄. 福建农林大学学报(自然科学版). 2013(06)
[8]多花水仙花期类胡萝卜素物质和类黄酮物质的含量变化[J]. 何炎森,杨碧云,李科,陈晓静. 热带作物学报. 2013(03)
[9]植物类黄酮O-甲基转移酶研究进展[J]. 张传丽,仲月明,沈丹红,陈鹏. 西北植物学报. 2012(06)
[10]漳州水仙花瓣和副冠类胡萝卜素成分分析及合成途径基因表达研究[J]. 曾原飞,张慧平,温超,曾黎辉. 热带作物学报. 2012(04)
博士论文
[1]何首乌中二苯乙烯苷生物合成相关基因的筛选与分析[D]. 赵炜.华南理工大学 2014
[2]葡萄风信子（Muscari）花色形成与相关基因研究[D]. 娄倩.西北农林科技大学 2014
[3]多花水仙花色相关基因的分离及功能分析[D]. 何炎森.福建农林大学 2013
[4]越橘果实转录组文库Solexa测序及花色素苷合成相关基因的表达分析[D]. 李晓艳.吉林农业大学 2012
[5]榛子花芽转录组文库的Solexa测序及冷调节基因的表达谱分析[D]. 陈新.中国林业科学研究院 2011
[6]金柑等柑橘类果实黄酮类化合物提取、纯化及分离鉴定[D]. 陈源.福建农林大学 2011
硕士论文
[1]‘平潭水仙’β-葡萄糖苷酶与挥发性芳香物质形成关系的研究[D]. 钟娴.福建农林大学 2014
[2]漳州水仙鳞茎盘转录组分析及类黄酮合成途径基因的表达[D]. 罗鹏.福建农林大学 2014
[3]不同花生品种类黄酮积累及其合成酶活性对干旱胁迫的响应[D]. 孙利.山东农业大学 2013
[4]无花果叶类黄酮提取、纯化、鉴定及抗氧化研究[D]. 吴子江.福建农林大学 2013
[5]水仙类胡萝卜素合成途径基因的表达及花色相关基因克隆[D]. 郑益平.福建农林大学 2013
[6]花瓣花色苷分离纯化技术及杂交后代花色苷遗传分析研究[D]. 陈越.宁波大学 2012
[7]观赏海棠花青素代谢途径与产物的研究[D]. 耿健.西南大学 2011
[8]洋葱类黄酮的提取及生物活性研究[D]. 郭詹菁.福建农林大学 2010
[9]中国水仙遗传转化及花色素成分分析[D]. 张慧平.福建农林大学 2010
[10]液—质联用法检测乳品中六种聚醚类抗生素的残留[D]. 雒丽丽.甘肃农业大学 2009
本文编号：3655573
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