芥菜AGL6、AGL15与SOC1、AGL24、SVP蛋白的互作研究
发布时间：2023-12-05 19:06
开花是植物生命活动过程中一个重要而复杂的过程,植物能感应环境因子的改变,并结合自身遗传因子做出相应的发育调控,以便在合适的环境条件下做出花的发育,从而最大可能的获取生存和繁殖后代的机会。这就使植物利用环境及遗传因子调控植物营养生长到生殖生长(即开花)的转变显得尤为重要,晚开花可能让植物生长得更加强壮,但不利于种子的产生;相对的,早开花不能保证植物有足够的能量储备来繁衍后代,由此可知开花时间的早晚关系到植物种子的形成,从而影响到植物种族的延续。影响植物开花的因素很多,包含环境因子和遗传因子,植物能通过多种遗传途径来对外界环境和植物内环境做出相应的反应,这些遗传途径复杂而精确地调控植物开花。遗传途径中涉及到多种调控花发育的基因整合子,包括促进开花的基因LEAFY、FT、SOC1、CO以及开花抑制基因FLC、SVP、FLM等。这些基因编码的蛋白大都属于于MADS-Like蛋白,如SCO1、AGL24、SVP等,它们能直接或间接的调控开花。有关SOC1、AGL24、SVP等蛋白的作用机制目前被广泛研究,其调控机制以及蛋白间的相互作用已经比较清楚。芥菜(Brassica juncea Coss)...
【文章页数】：144 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物开花研究进展
1.1.1 春化途径和自主途径调控开花
1.1.2 光周期和赤霉素对开花的影响
1.1.3 温度对植物开花的影响
1.2 MADS-box蛋白家族
1.3 花器官发育模型
1.4 AGL6-Like基因研究进展
1.5 AGL15-Like基因研究进展
1.6 蛋白相互作用研究方法
1.6.1 酵母双杂交
1.6.2 双分子荧光互补技术(BiFC)
1.7 DNA与蛋白互作研究方法
1.7.1 酵母单杂交技术
1.7.2 双萤光素酶法
第二章引言
第三章 芥菜AGL6、AGL15及AGL15启动子的克隆及生物分析
3.1 材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌种及载体
3.1.3 试验试剂
3.1.4 主要试验仪器
3.2 方法
3.2.1 试验试剂的配制
3.2.2 总RNA提取(TRIZOL? Reagent)
3.2.3 总RNA的反转录
3.2.4 芥菜基因组DNA的提取
3.2.5 PCR目的条带的回收(OMEGA Gel Extraction kit)
3.2.6 质粒提取(OMEGA Plasmid Mini Kit)
3.2.7 阳性克隆的确定
3.2.8 引物设计
3.2.9 芥菜AGL6、AGL15的cDNA与DNA特异性PCR扩增
3.2.10 芥菜AGL15启动子克隆
3.2.11 生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 芥菜总RNA和DNA的提取
3.3.2 芥菜AGL6、AGL15的cDNA克隆
3.3.3 芥菜AGL6、AGL15的DNA克隆
3.3.4 芥菜AGL6的序列分析
3.3.5 芥菜AGL15的序列分析
3.3.6 AGL15启动子的克隆
3.3.7 AGL15启动子的分析
第四章 芥菜AGL6、AGL15蛋白与SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
4.1 材料
4.1.1 试验材料
4.1.2 菌种及载体
4.1.3 试验试剂
4.1.4 试验仪器
4.2 试验方法
4.2.1 试验试剂的配制
4.2.2 酵母双杂交检测 AGL6、AGL15 与 SOC1、SVP、AGL24 蛋白互作
4.2.3 BiFC检测AGL6、AGL15与SOC1、SVP、AGL24蛋白互作
4.3 结果与分析
4.3.1 酵母表达载体的构建
4.3.2 酵母重组质粒的自激活及毒性检测
4.3.3 BiFC重组质粒的构建
4.3.4 酵母双杂交鉴定蛋白相互作用
4.3.5 BiFC鉴定蛋白间的相互作用
第五章 芥菜AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
5.1 材料
5.2 方法
5.2.1 试验试剂的配制
5.2.2 AGL6蛋白相互作用位点的预测
5.2.3 AGL6基因突变体的引物设计
5.2.4 AGL6基因突变体构建
5.2.5 AGL6突变体的酵母表达载体的构建
5.2.6 AGL6突变体的BiFC载体的构建
5.2.7 蛋白互作检测
5.3 结果与分析
5.3.1 AGL6突变体的构建
5.3.2 AGL6氨基酸敲除突变载体构建
5.3.3 AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP的互作
第六章 芥菜AGL15氨基酸敲除突变体与AGL24的蛋白互作
6.1 材料
6.2 方法
6.2.1 试验试剂的配制
6.2.2 AGL15蛋白互作位点的预测
6.2.3 AGL15氨基酸敲除突变体引物设计
6.2.4 AGL15突变体酵母和BiFC重组质粒的构建
6.2.5 AGL6突变体蛋白互作
6.3 结果与分析
6.3.1 AGL15突变体的酵母表达质粒的构建
6.3.2 AGL15突变体的BiFC重组质粒的构建
6.3.3 蛋白互作鉴定
第七章 芥菜AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL6、AGL15蛋白的相互作用
7.1 材料
7.1.1 菌株与载体
7.1.2 试验试剂
7.1.3 试验仪器
7.2 试验方法
7.2.1 试验试剂的配制
7.2.2 AGL15启动子表达载体的构建
7.2.3 酵母单杂交检测AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
7.2.4 双萤光素酶检测AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
7.3 结果与分析
7.3.1 酵母单杂交表达载体的构建
7.3.2 双萤光素表达载体构建
7.3.3 AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白的相互作用
第八章 讨论
第九章 结论
9.1 成功克隆芥菜AGL6、AGL15基因
9.2 获得芥菜AGL15的启动子
9.3 芥菜AGL6能与SOC1、AGL24、SVP蛋白互作
9.4 芥菜AGL15不能与SOC1、SVP、AGL6互作，能与AGL24互作
9.5 芥菜AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP互作鉴定
9.6 芥菜AGL15氨基酸敲除突变体与AGL24蛋白的相互鉴定
9.7 芥菜AGL15启动子能与蛋白SOC1、AGL24、AGL15蛋白互作
参考文献
附录
致谢
项目资助
在校期间发表学术论文
本文编号：3870721
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【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物开花研究进展
1.1.1 春化途径和自主途径调控开花
1.1.2 光周期和赤霉素对开花的影响
1.1.3 温度对植物开花的影响
1.2 MADS-box蛋白家族
1.3 花器官发育模型
1.4 AGL6-Like基因研究进展
1.5 AGL15-Like基因研究进展
1.6 蛋白相互作用研究方法
1.6.1 酵母双杂交
1.6.2 双分子荧光互补技术(BiFC)
1.7 DNA与蛋白互作研究方法
1.7.1 酵母单杂交技术
1.7.2 双萤光素酶法
第二章引言
第三章 芥菜AGL6、AGL15及AGL15启动子的克隆及生物分析
3.1 材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌种及载体
3.1.3 试验试剂
3.1.4 主要试验仪器
3.2 方法
3.2.1 试验试剂的配制
3.2.2 总RNA提取(TRIZOL? Reagent)
3.2.3 总RNA的反转录
3.2.4 芥菜基因组DNA的提取
3.2.5 PCR目的条带的回收(OMEGA Gel Extraction kit)
3.2.6 质粒提取(OMEGA Plasmid Mini Kit)
3.2.7 阳性克隆的确定
3.2.8 引物设计
3.2.9 芥菜AGL6、AGL15的cDNA与DNA特异性PCR扩增
3.2.10 芥菜AGL15启动子克隆
3.2.11 生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 芥菜总RNA和DNA的提取
3.3.2 芥菜AGL6、AGL15的cDNA克隆
3.3.3 芥菜AGL6、AGL15的DNA克隆
3.3.4 芥菜AGL6的序列分析
3.3.5 芥菜AGL15的序列分析
3.3.6 AGL15启动子的克隆
3.3.7 AGL15启动子的分析
第四章 芥菜AGL6、AGL15蛋白与SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
4.1 材料
4.1.1 试验材料
4.1.2 菌种及载体
4.1.3 试验试剂
4.1.4 试验仪器
4.2 试验方法
4.2.1 试验试剂的配制
4.2.2 酵母双杂交检测 AGL6、AGL15 与 SOC1、SVP、AGL24 蛋白互作
4.2.3 BiFC检测AGL6、AGL15与SOC1、SVP、AGL24蛋白互作
4.3 结果与分析
4.3.1 酵母表达载体的构建
4.3.2 酵母重组质粒的自激活及毒性检测
4.3.3 BiFC重组质粒的构建
4.3.4 酵母双杂交鉴定蛋白相互作用
4.3.5 BiFC鉴定蛋白间的相互作用
第五章 芥菜AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP的蛋白互作研究
5.1 材料
5.2 方法
5.2.1 试验试剂的配制
5.2.2 AGL6蛋白相互作用位点的预测
5.2.3 AGL6基因突变体的引物设计
5.2.4 AGL6基因突变体构建
5.2.5 AGL6突变体的酵母表达载体的构建
5.2.6 AGL6突变体的BiFC载体的构建
5.2.7 蛋白互作检测
5.3 结果与分析
5.3.1 AGL6突变体的构建
5.3.2 AGL6氨基酸敲除突变载体构建
5.3.3 AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP的互作
第六章 芥菜AGL15氨基酸敲除突变体与AGL24的蛋白互作
6.1 材料
6.2 方法
6.2.1 试验试剂的配制
6.2.2 AGL15蛋白互作位点的预测
6.2.3 AGL15氨基酸敲除突变体引物设计
6.2.4 AGL15突变体酵母和BiFC重组质粒的构建
6.2.5 AGL6突变体蛋白互作
6.3 结果与分析
6.3.1 AGL15突变体的酵母表达质粒的构建
6.3.2 AGL15突变体的BiFC重组质粒的构建
6.3.3 蛋白互作鉴定
第七章 芥菜AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL6、AGL15蛋白的相互作用
7.1 材料
7.1.1 菌株与载体
7.1.2 试验试剂
7.1.3 试验仪器
7.2 试验方法
7.2.1 试验试剂的配制
7.2.2 AGL15启动子表达载体的构建
7.2.3 酵母单杂交检测AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
7.2.4 双萤光素酶检测AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白互作
7.3 结果与分析
7.3.1 酵母单杂交表达载体的构建
7.3.2 双萤光素表达载体构建
7.3.3 AGL15启动子与SOC1、AGL24、AGL15、AGL6蛋白的相互作用
第八章 讨论
第九章 结论
9.1 成功克隆芥菜AGL6、AGL15基因
9.2 获得芥菜AGL15的启动子
9.3 芥菜AGL6能与SOC1、AGL24、SVP蛋白互作
9.4 芥菜AGL15不能与SOC1、SVP、AGL6互作，能与AGL24互作
9.5 芥菜AGL6氨基酸敲除突变体与SOC1、AGL24、SVP互作鉴定
9.6 芥菜AGL15氨基酸敲除突变体与AGL24蛋白的相互鉴定
9.7 芥菜AGL15启动子能与蛋白SOC1、AGL24、AGL15蛋白互作
参考文献
附录
致谢
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在校期间发表学术论文
本文编号：3870721
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