美味猕猴桃果实中糖卸载特性分析

发布时间：2024-03-28 01:36

　　韧皮部卸载对光合产物的分配及糖的积累具有重要的调控作用。果实发育过程中糖卸载代谢积累机制的研究对果树库源关系的调控和品质改良具有重要意义。为探明猕猴桃果实中碳水化合物的卸载机制,本论文从生理、生化、细胞及分子层面研究了美味猕猴桃‘秦美’果实中碳水化合物的卸载途径及其可能的调控基因,并利用农杆菌介导法将苹果果实中参与质外体卸载的己糖转运蛋白进行美味猕猴桃转化试验,主要结果如下:1、通过韧皮部卸载液鉴定、果实维管束胞间连丝观察、荧光示踪剂等技术对猕猴桃的糖卸载途径分析发现,在美味猕猴桃‘秦美’的叶柄和果柄韧皮部卸载液中主导的碳水化合物是蔗糖,不存在山梨醇、水苏糖等其他可进行长距离运输的化合物。这说明蔗糖是猕猴桃中长距离运输的碳水化合物。通过果实维管束超薄切片技术,经电子显微镜结构分析表明在猕猴桃果实发育过程中,果实的筛管伴胞细胞复合体与周围的薄壁细胞间未发现胞间连丝的存在;果实薄壁细胞与果肉细胞之间存在丰富的胞间连丝。以通过共质体自由扩散的羧基荧光素作为荧光示踪剂研究发现,在果实发育过程中经果柄运输的荧光信号均被限制在维管束中,而没有扩散到周围的薄壁细胞中。这些结果表明,在美味猕猴桃中,蔗...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 植物体内蔗糖合成代谢途径
        1.1.1 蔗糖的合成途径
        1.1.2 海藻糖的合成途径
        1.1.3 蔗糖降解途径
    1.2 果实韧皮部卸载途径
    1.3 维C之王：猕猴桃
    1.4 本文的研究目的和意义
第二章 猕猴桃果实糖卸载模式的建立
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 韧皮部汁液的鉴定
        2.1.3 荧光染料示踪试验
        2.1.4 猕猴桃果实维管束超薄切片的制作
    2.2 结果分析
        2.2.1 韧皮部汁液的鉴定
        2.2.2 果实SE/CC细胞与PCs间并无胞间连丝的联系
        2.2.3 CF一直被限制在果实维管束中
    2.3 讨论
        2.3.1 猕猴桃长距离运输的物质是蔗糖
        2.3.2 猕猴桃果实中韧皮部卸载模式是质外体途径
第三章 猕猴桃糖转运及糖代谢机理
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 可溶性糖的测定
        3.1.3 酶活分析
        3.1.4 候选基因的鉴定
        3.1.5 mRNA表达分析
    3.2 结果分析
        3.2.1 猕猴桃果实中糖积累模式
        3.2.2 源库中蔗糖代谢酶的酶活
        3.2.3 源库中糖转运及代谢相关基因的表达
        3.2.4 果实不同部位糖转运及代谢相关基因的表达
    3.3 讨论
        3.3.1 猕猴桃果实中糖积累模式
        3.3.2 猕猴桃果实中糖卸载及代谢模式
第四章 MdHT2.2 的克隆及猕猴桃转基因
    4.1 材料和方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株和质粒
        4.1.3 核酸的提取
        4.1.4 培养基配制
        4.1.5 引物合成及测序
        4.1.6 克隆用cDNA的合成
        4.1.7 PCR扩增产物回收
        4.1.8 PCR回收产物连接T19载体
        4.1.9 链接产物转化大肠杆菌
        4.1.10 构建植物表达载体
        4.1.11 转化农杆菌
        4.1.12 转化猕猴桃
        4.1.13 转化株系的鉴定
        4.1.14 叶片可溶性糖的测定
    4.2 结果分析
        4.2.1 表达载体的构建
        4.2.2 转基因猕猴桃的获得
        4.2.3 转基因猕猴桃RT-PCR鉴定
        4.2.4 转基因猕猴桃叶片中可溶性糖含量的测定
        4.2.5 转基因猕猴桃生根过程中对激素敏感性探究
    4.3 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3940805