磷脂酶产生菌的筛

发布时间：2020-06-15 21:54

【摘要】：磷脂酶(phospholipase)是一类可以将水化磷脂水解成为脂肪酸和水化磷脂的酶,在医药,食品、化工等众多行业都具有重要应用。本文从土壤中筛选出磷脂酶产生菌并进行了鉴定、发酵条件优化、酶的分离纯化、酶的基本性质等相关的研究,最后对该酶的催化产物进行了表征。本课题首先从土壤中筛选出磷脂酶产生菌B8,经形态观察和18S r DNA测序鉴定为黑曲霉。对该菌株产生磷脂酶的发酵条件经初步优化,确定为:1.5%麦芽糖,0.5%卵磷脂,1%酵母粉,0.05%Na H2PO4·2H2O,0.10%K2HPO4·3H2O,0.06%Mg SO4·7H2O,0.05%Ca Cl2,初始p H为6.5,最适温度30℃,转速220 r/min,培养时间4天。对黑曲霉B8发酵液进行分离纯化得到磷脂酶,SDS-PAGE电泳表明该酶蛋白的分子量约为40 k Da。该酶的酶学性质为:最适温度为30℃,最适p H为6.5,最合适的底物为卵磷脂,Ca2+和Mg2+对该酶有一定的促进作用,SDS和EDTA对该酶有较强的抑制作用。利用该磷脂酶以卵磷脂为底物进行催化反应,转化率为40%左右,对产物进行简单分离纯化和初步表征,表明催化产物为甘油磷酸胆碱。
【学位授予单位】：合肥工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：TQ925
【图文】：

图 1.2 不同磷脂酶的作用位点[19]Figure1.2 The catalytic mechanism of phospholipases on phosphatidyleho磷脂酶 A1（phospholipaseA1）作用于 Sn-1 位的脂肪酸使之水解-酰基溶血性磷脂，该溶血性磷脂上 Sn-2 位的脂肪酸能够转移至 S被水解[20]，所以会有部分磷脂可被磷脂酶 A1 完全水解。磷脂酶专一性步枪不强，兼具有一定的脂肪酶活性[21]。磷脂酶 A1 广泛物中。磷脂酶 A2（phospholipaseA2）作用于 Sn-2 位上的脂肪酸使之水溶血磷脂。它广泛存在于生物体内，尤其是富含于蛇的毒液和哺的分泌液中[22]。PLA2 参与多种生理过程，包括磷脂消化，信号膜重塑和宿主防御[23]。市场上已有商品名为 Lecitase10L 的 PLA磷脂酶 B（phospholipaseB）水解 SN-1 及 SN-2 的酰基，释放出；也称作溶血磷脂酶。磷脂酶 C（phospholipaseC）切的位置在磷酸盐基团前，并释

合肥工业大学专业硕士研究生学位论文His280、Ser141 三个氨基酸残基组成，这个三联体通过氢键相连，当底物吸附到活性中心时 Ser 上面的羟基氧孤对电子对电子进攻羰基碳正离子形成四元环的中间体，这时 Ser 和 His 之间的氢键断裂，释放产物和 Ser 酰基脂肪酸[110,111]。

【参考文献】

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本文编号：2715053