共载多西他赛和藤黄酸白蛋白纳米粒的初步研究

发布时间：2020-07-05 08:14

【摘要】：胃癌是世界上最常见的疾病之一,现已成为世界范围内严重的公共卫生问题。在中国,胃癌是癌症相关死亡的第二大原因,且发病率呈上升趋势。目前,治疗胃癌多采用手术切除、化疗或放疗,但治疗后5年内的生存率仍然不足20%。肿瘤具有一定的适应力且能对多种细胞毒性药物产生抗性,这也是化疗失败的主要原因——多药耐药性(MDR)。将纳米技术应用于逆转MDR的研究是当今新药研究的前沿课题,纳米技术寻求使用直径为1~100 nm的药物输送载体,其由几种不同的材料组成,向癌细胞输送抗癌药物,并克服MDR。多西他赛(DTX)是在合成紫杉醇的过程中发现的中间产物,是美国食品药品监督管理局于1998年批准上市的紫杉烷类抗癌药物。藤黄酸(GA)是一种具有笼状氧杂蒽醌结构的天然化合物,且是藤黄科植物藤黄树分泌的有效成分之一。多项临床前研究表明,GA对多种恶性肿瘤(包括实体和血液系统癌症)具有抗癌特性,但对人体正常细胞具有耐药性。GA能够通过抑制survivin的表达来恢复胃癌细胞株对DTX的敏感性。GA还可以通过下调存活蛋白表达和诱导细胞凋亡使人胃癌细胞对DTX敏感。在胃肠细胞中,GA通过抑制DTX诱导凋亡相关基因β-微管蛋白Ⅲ,tau和survivin的mRNA表达,对其致敏作用至关重要。此外,由于DTX和GA水溶性很差,现有注射剂多利用辅助溶剂给药,但助溶剂黏性大、具有溶血性,且在临床实验中,多数患者会产生刺激性和过敏反应。因此,开发一种新的剂型,以提高DTX和GA在水中的溶解度,减少溶剂带来的毒性和不良反应,同时GA协同DTX可以提高药物疗效,克服MDR。载体选择牛血清白蛋白,因其具有更高的治疗指数和安全性,相较于助溶剂能显著降低不良反应,已成为近年来新型药物传递系统研究的热点。本研究首先考察了测定多西他赛和藤黄酸含量的体外高效液相色谱方法学。多西他赛的回归方程为:Y=681547X-20446(R~2=0.9999),线性范围为:4.404~22.02μg。藤黄酸的回归方程为:Y=1.693×10~6X-3.076×10~6(R~2=0.9992),线性范围为:4.004~20.02μg。各项参数与药物的含量测定要求均达到标准。同时,本实验对DTX和GA制剂的体外释放度的进行了研究,均为后续测定DTX和GA制剂的包封率和体外释放度提供了可靠的依据。采用Nab~(TM) technology制得共载多西他赛和藤黄酸白蛋白纳米粒(DTX-GA-BSA NPs)混悬剂。筛选最佳油相比为二氯甲烷:乙醇=2:1。利用星点设计-效应面法筛选出最优处方为BSA质量浓度5 g·L~(-1),水油体积比(水相与油相的体积比)=1:17,药载比(药物与载体的质量比)=1:10。制得的DTX-GA-BSA NPs混悬剂平均粒径135.8 nm,PDI=0.09,Zeta电位-21.4 mV,外观为均匀透明的淡黄色溶液。由此可知,DTX-GA-BSA NPs混悬剂的平均粒径较小,分布窄且均匀。本课题选取人胃癌低分化细胞MGC-803和人胃癌中分化细胞HGC-27细胞系为模型细胞,采用药物相互作用指数(CDI)分析DTX和GA联合应用的协同作用,经过筛选得到DTX和GA的最佳协同作用比例。体外细胞实验表明DTX和GA对人胃癌细胞的增殖抑制具有协同作用,且PTX:TMZ=1:23(w/w)时,对MGC-803细胞的协同抑制作用最强;而PTX:TMZ=1:195(w/w)时,对HGC-27细胞的协同抑制作用最强。综上所述,本实验制备的DTX-GA-BSA NPs粒径较小、稳定性好,且能延缓药物释放;优选的DTX-GA-BSA NPs处方工艺稳定可靠,建立的数学模型具有良好预测能力和实用性。这些为DTX和GA新型给药系统研究提供了一种新的有效策略。此外,在此基础上,又通过体外细胞实验证明DTX和GA对MGC-803细胞,HGC-27细胞具有协同增殖抑制作用,采用CDI分析DTX和GA联合应用的协同性,经过筛选得到DTX与GA的最佳协同作用比例。后续将继续研究DTX-GA-BSA NPs的体外协同抗胃癌的行为,选择DTX和GA以最佳协同比例共载入纳米粒,进一步评价DTX-GA-BSA NPs中DTX和GA的体外协同抗人胃癌细胞的作用,探讨BSA所携带的药物是否能更好地发挥疗效。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943
【图文】：

结构式,紫杉醇,欧洲红豆杉,头颈癌

MW=807.9g/mol，分子式为 C43H53NO14，结构式如图0-1。从欧洲红豆杉（Taxus baccata L.）获得的半合成植物生物碱（紫杉醇的基础上改构），是一种新型的紫杉烷类抗肿瘤药。美国食品药品监督管理局（FDA）批准的适应症包括：胃癌，肺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌和头颈癌。许多研究表明，DTX 的活性至少高于紫杉醇 5 倍。DTX 为白色或近白色粉状物，熔点232，密度为 1.37gcm-1，闪点 498.4，沸点 900.5，本品几乎溶?

藤黄酸,结构式,黄酸

图 0-2 藤黄酸结构式黄酸的作用机制酸作用机制包括：诱导细胞凋亡，降低细胞增殖，增强活性氧导自噬，抑制端粒酶活性和核因子 κ 轻链增强子活性 B 细胞截转导通路[34-40]。大量研究显示藤黄酸具有抗胃癌的潜力。赵等黄酸可以通过增加 Bax 的表达和抑制 bc1-2 的表达，可以诱导，而不影响正常细胞。藤黄酸还能通过下调 C-myc 来降低人HTERT）的转录活性和抑制 BGC-823 细胞中 Akt 的磷酸化来修饰，从而抑制 BGC-823、MGC-803 和 SGC-7901 人胃癌细黄酸处理过的 BGC-823 细胞出现抑制增殖时，导致 CDK7 激

【相似文献】