渗透压调节对林可霉素发酵影响及其机制研究

发布时间：2021-06-18 09:51

　　林可霉素是林可酰胺类抗生素中的一种,在临床应用广泛。本课题以降低林可霉素B含量为目标,以渗透压调节为切入点,从摇瓶优化放大至15L发酵罐,并研究了渗透压影响林可霉素合成的机理。首先通过摇瓶实验确定林可霉素发酵合适的初始渗透压范围为0.860-1.355 Osmol/kg。利用中心组合设计对渗透压调节剂（氯化钠、氯化钾、氯化钙）与保护剂（甘油、甘露醇、甜菜碱、甘氨酸、脯氨酸）及抗氧化剂（半胱氨酸）进行组合优化,得到最优条件为:氯化钠10.93 g/L,甘油2.25 g/L,脯氨酸0.057g/L。摇瓶验证结果为,林可霉素B含量为1.42%,相比对照（3.58%）降低60.33%;产物林可霉素A效价为5795 U/mL,相比对照（4326 U/mL）提高33.96%。进一步在15 L发酵罐上研究渗透压调节对林可霉素发酵的影响,发现添加10 g/LNaCl后林可霉素B含量显著降低,放罐时,条件罐的林可霉素B含量（5.78%）相比对照罐（8.20%）显著降低29.51%。建立了林可链霉菌中含硫代谢物半胱氨酸、高半胱氨酸、麦角硫因等物质的测定方法。添加NaCl后半胱氨酸含量较对照低而高半胱氨酸含... 

【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１不同菌株的林可霉素生物合成基因簇Ｍ??１７

取丨ｍＬ发酵液，室温ｌＯＯＯＯｒｐｍ离心ｌＯｍｉｎ，取上清液，用流动相稀释至预估效价??为１０００?Ｕ／ｍＬ，用０．２２?ｐｍ的水系滤膜过滤后备用。??２）测试条件及色谱柱??流动相：４０％的５０１１１１１１〇丨几乙酸铵溶液与６０％的甲醇，流速为０．４１１１１７１１１丨１１；色谱柱：??Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ?Ｐｌｕｓ?Ｃ１８－Ａ色谱柱（北京迪马科技有限公司），２５〇ｘ４．６?ｍｍ，５?（ａｍ；柱温设??定为３０?°Ｃ，检测波长设定为２１０?ｎｍ，进样量设定为２０?ｐＬ。通过外标法测定产物林可??霉素Ａ的效价，其中杂质林可霉素Ｂ含量计算见公式（２－２）：??Ｌｉｎ?Ｂ％?＝——〇〇?公式（２－２）??ＬｉｎＡ峰面积＋ＬｉｎＢ峰面积??３）林可霉素Ａ与杂质Ｂ组分标准品的液相图谱，见图２．１所示。??

华东理工大学硕士学位论文?第２１页??厢始数据过滤???］［???ｔｍｍｓｍｓ?????］［???ｓ因组注释?——比对到参考ｓ因组???｛???比对结果评估???Ｔ??Ｉ??轉？本结构分析?衷达塞男ｓ因分枳??”?＇，?”?”?备?，〖?＾?士??认ｐ“《；?新拜录本?ＳＲＮＡ?娜子分?ＵＴｂ〇？?Ｇ〇?ＫＥＧＧ?８异基因??５ＮＰＷ?獅?分析析?ｕｉｋｗｗ?苗集分柝?Ｓ集分枳?緊类分ｔｆＦ??图２．４?ＲＮＡ－ｓｅｑ的生物信息学分析流程??Ｆｉｇ?２．４?Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ＲＮＡ－ｓｅｑ??

【参考文献】：
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本文编号：3236446