植物激素茉莉酸类物质和抗癌药物五氟尿嘧啶抗体的制备以及酶联免疫吸附分析方法的建立

发布时间：2021-08-01 14:51

　　酶联免疫吸附分析方法（ELISA）是一种成熟的、可用于定性或定量检测的免疫分析方法,具有较高的灵敏度和较强的特异性。本文利用ELISA建立两种物质的定量分析方法,这两种物质分别是植物激素茉莉酸类物质和抗癌药物五氟尿嘧啶。茉莉酸类（JAs）物质主要包括茉莉酸（JA）和茉莉酸甲酯（MeJA）,是一类可调节植物生长发育和抗逆性的植物激素。JAs在植物体内含量很低,不当地使用外源性JA或MeJA还会降低生态效益。且JA和MeJA在生理功能上具有一定的差异,同时检测JA和MeJA仍然是植物生物学家面临的难题。因此,有必要建立一种灵敏度高、特异性强的方法,用于检测植物中JA和MeJA各自的含量。本文第一部分运用杂交瘤抗体制备技术,制备了针对茉莉酸的单克隆抗体（mAb）,并以mAb为基础,结合两种样品提取法方法,建立了同时测定JA和MeJA的ELISA。所建立的ELISA的半抑制浓度（IC50）和检出限（LOD）值分别为2.02 ng mL-1和0.201 ng mL-1。交叉反应实验结果表明所建立的ELISA特异性良好。加标回收实验的回收率在79.6-89.5%,在可接受范围内,且与HPLC方法相... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 免疫分析方法概述
        1.2.1 免疫学发展简史
        1.2.2 免疫分析方法的基本原理
    1.3 酶联免疫吸附分析方法简述
        1.3.1 ELISA的基本原理
        1.3.2 ELISA的分类
        1.3.3 ELISA方法的建立
        1.3.4 ELISA的现状
    1.4 茉莉酸类物质概述
        1.4.1 茉莉酸类物质简介
        1.4.2 茉莉酸与茉莉酸甲酯的区别
        1.4.3 茉莉酸和茉莉酸甲酯的检测方法
    1.5 抗癌药物五氟尿嘧啶概述
        1.5.1 五氟尿嘧啶简介
        1.5.2 五氟尿嘧啶在临床使用中的局限性
        1.5.3 五氟尿嘧啶的检测方法
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 茉莉酸单克隆抗体的制备
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器和设备
        2.2.3 溶液配制
        2.2.4 实验动物
    2.3 茉莉酸单克隆抗体的制备
        2.3.1 茉莉酸免疫原、包被原的制备
        2.3.2 动物的免疫流程
        2.3.3 细胞培养
        2.3.4 杂交瘤细胞的冻存
        2.3.5 单克隆抗体的大量生产
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 茉莉酸免疫原、包被原的合成
        2.4.2 小鼠抗血清效价的测定
        2.4.3 杂交瘤细胞的筛选
        2.4.4 杂交瘤细胞的亚克隆
        2.4.5 单克隆抗体的生产
    2.5 本章小结
第三章 茉莉酸甲酯酶联免疫吸附分析方法的建立
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器和设备
        3.2.3 溶液配制
    3.3 实际样品提取方法的建立
    3.4 茉莉酸甲酯ic-ELISA的建立
        3.4.1 检测茉莉酸甲酯的间接竞争ELISA的步骤
        3.4.2 实验条件的优化
        3.4.3 方法特异性的考察
        3.4.4 甲醇对ic-ELISA结果的影响
        3.4.5 方法准确性的考察
        3.4.6 实际样品的检测
        3.4.7 HPLC检测方法
    3.5 结果与讨论
        3.5.1 茉莉酸甲酯ic-ELISA条件优化
        3.5.2 茉莉酸甲酯ic-ELISA方法特异性
        3.5.3 甲醇对茉莉酸甲酯ic-ELISA的影响
        3.5.4 茉莉酸甲酯ic-ELISA方法准确性
        3.5.5 植物样品的检测
        3.5.6 本方法与其他方法的比较
    3.6 本章小结
第四章 五氟尿嘧啶抗体的制备与ic-ELISA的建立
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 实验仪器和设备
        4.2.3 溶液配制
    4.3 五氟尿嘧啶多克隆抗体的制备
        4.3.1 五氟尿嘧啶半抗原的修饰
        4.3.2 五氟尿嘧啶免疫原、包被原的制备
        4.3.3 动物的免疫流程
        4.3.4 兔抗血清效价的测定
        4.3.5 多克隆抗体的收集
    4.4 检测五氟尿嘧啶的间接竞争ELISA的建立
        4.4.1 五氟尿嘧啶ic-ELISA的步骤
        4.4.2 五氟尿嘧啶ic-ELISA条件优化
        4.4.3 五氟尿嘧啶ic-ELISA方法特异性
    4.5 结果与讨论
        4.5.1 五氟尿嘧啶多克隆抗体的制备
        4.5.2 五氟尿嘧啶ic-ELISA方法的建立
    4.6 五氟尿嘧啶单克隆抗体的制备
        4.6.1 动物的免疫流程
        4.6.2 单克隆抗体的制备
    4.7 结果与讨论
        4.7.1 小鼠抗血清效价的测定
        4.7.2 阳性杂交瘤细胞的筛选及亚克隆
    4.8 本章小结
参考文献
硕士期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[3]兔抗GCET2单克隆抗体的制备及其在DLBCL诊断中的应用[D]. 潘红阳.浙江大学 2016
[4]三聚氰胺、沙丁胺醇及苯乙醇胺A的酶联免疫吸附分析法（ELISA）的研究和应用[D]. 曹碧云.苏州大学 2013



本文编号：3315727