Bacillus stearothermophilus α/β-环糊精葡萄糖基转移酶在Bacillus subtilis
发布时间：2021-08-30 12:07
环糊精葡萄糖基转移酶（Cyclodextrin Glycosyltransferase,CGTase）是一种多功能酶,广泛应用于2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸等高附加值衍生物的制备,Bacillus stearothermophilus NO2来源的α/β-CGTase凭借其优秀的转糖基作用和高特异性,成为工业生产中使用最广泛的酶种之一。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,B.subtilis）是一种食品安全菌株,实验室前期通过自然界筛选和基因组定向改造,获得高效表达外源蛋白的宿主菌B.subtilis WSH11。本研究通过筛选启动子、信号肽和蛋白质分子改造提高α/β-CGTase在B.subtilis WSH11中的表达水平,并考察α/β-CGTase野生型和突变体的酶学性质,最后定向改造表达宿主B.subtilis WSH11。主要研究结果如下:（1）以质粒pHY300PLK为骨架,构建α/β-CGTase在B.subtilis WSH11表达系统中重组表达的质粒。为了提高α/β-CGTase的表达量,考察9个单启动子对α/β-CGTase表达的影响。经摇瓶发...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
几种脂肽的结构
图 1-3 有序/无序蛋白质组分简况[68]Fig. 1-3 Order/disorder composition profile无序蛋白质的氨基酸组分进行分析外，Williams R M等对电荷、柔韧性指数、螺旋链倾向以及氨基酸的组合等也种不同性质的蛋白进行分析后，新的促折叠氨基酸和不折叠到阻碍折叠的顺序排列：W，F，Y，I，M，L，，Q，K，S，E，P[74, 75]。性质与蛋白转运探究胞外蛋白质和细胞质蛋白质 N 末端氨基酸组成的分析 B. subtilis 的 sec 途径分泌蛋白和细胞质蛋白质的白 N 端中不折叠氨基酸的含量为 59.87%，明显高于细比例 45.34%。说明胞外蛋白质的 N 端以不折叠氨基酸白质肽链与细胞内各种辅因子结合，利于蛋白质运输；叠氨基酸为主，易形成高级结构，导致不利于蛋白质之外[76]。
pHYα/βCGTn7530bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APnα/β-CGTasepHYα/βCGT17604bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APamyQα/β-CGTase+启动子平末端连接n2：PamyQ3： PaprE4： PgsiB5： PhpaII6： PnprE7： Psrf8： Pxyl9： Pxyl’图 3-2 重组质粒 pHYα/βCGTn 的构建过程Fig. 3-2 The construction of expression pHYα/βCGTn vector
【参考文献】：
期刊论文
[1]多黏芽孢杆菌产ɑ-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达及其转化产物特异性研究[J]. 王琰,李皎,杨国武,王军,邓媛,万一. 中国食品添加剂. 2017(02)
[2]信号肽及化学通透剂对环糊精葡萄糖基转移酶胞外分泌的影响[J]. 蔡海松,林晓栩,郭永华,陈龙军,张慧,邱宏端,林新坚,陈济琛. 微生物学通报. 2017(03)
[3]细菌麦芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的诱导型异源表达[J]. 杨韵霏,李由然,张梁,李赢,顾正华,丁重阳,石贵阳. 微生物学通报. 2017(02)
[4]无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株[J]. 张明俐,柳鹏福,史吉平,曾勇. 食品工业科技. 2016(14)
[5]信号肽对Bacillus subtilis表达环糊精葡萄糖基转移酶的影响[J]. 毛婷,李江华,刘龙,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2016(02)
[6]环糊精葡萄糖基转移酶的酿酒酵母表面展示及其生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸[J]. 熊艳军,宿玲恰,王蕾,吴敬,陈晟. 微生物学报. 2015(10)
[7]枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展[J]. 余小霞,田健,刘晓青,伍宁丰. 生物技术通报. 2015(02)
[8]枯草芽孢杆菌OKB105产生的surfactin防治烟草花叶病毒病及其机理研究[J]. 任鹏举,谢永丽,张岩,伍辉军,高学文. 中国生物防治学报. 2014(02)
[9]食品级枯草芽孢杆菌表达系统的最新研究进展[J]. 王金斌,陈大超,李文,蒋玮,李鹏,张倩倩,唐雪明. 上海农业学报. 2014(01)
[10]天然无序蛋白质:序列-结构-功能的新关系[J]. 黄永棋,刘志荣. 物理化学学报. 2010(08)
博士论文
[1]枯草芽孢杆菌及链霉菌表达系统的构建及应用研究[D]. 关成冉.江南大学 2016
[2]β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的分泌表达及其热稳定性研究[D]. 李才明.江南大学 2014
[3]枯草芽孢杆菌中Sec分泌途径底物特性及非经典分泌途径的研究[D]. 王光强.江南大学 2013
硕士论文
[1]Bacillus stearothermophilus环糊精葡萄糖基转移酶在短小芽孢杆菌中的重组表达、发酵优化及应用研究[D]. 范博望.江南大学 2016
本文编号：3372747
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
几种脂肽的结构
图 1-3 有序/无序蛋白质组分简况[68]Fig. 1-3 Order/disorder composition profile无序蛋白质的氨基酸组分进行分析外，Williams R M等对电荷、柔韧性指数、螺旋链倾向以及氨基酸的组合等也种不同性质的蛋白进行分析后，新的促折叠氨基酸和不折叠到阻碍折叠的顺序排列：W，F，Y，I，M，L，，Q，K，S，E，P[74, 75]。性质与蛋白转运探究胞外蛋白质和细胞质蛋白质 N 末端氨基酸组成的分析 B. subtilis 的 sec 途径分泌蛋白和细胞质蛋白质的白 N 端中不折叠氨基酸的含量为 59.87%，明显高于细比例 45.34%。说明胞外蛋白质的 N 端以不折叠氨基酸白质肽链与细胞内各种辅因子结合，利于蛋白质运输；叠氨基酸为主，易形成高级结构，导致不利于蛋白质之外[76]。
pHYα/βCGTn7530bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APnα/β-CGTasepHYα/βCGT17604bpTcRrepBterminat ororiAmpRp15APamyQα/β-CGTase+启动子平末端连接n2：PamyQ3： PaprE4： PgsiB5： PhpaII6： PnprE7： Psrf8： Pxyl9： Pxyl’图 3-2 重组质粒 pHYα/βCGTn 的构建过程Fig. 3-2 The construction of expression pHYα/βCGTn vector
【参考文献】：
期刊论文
[1]多黏芽孢杆菌产ɑ-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达及其转化产物特异性研究[J]. 王琰,李皎,杨国武,王军,邓媛,万一. 中国食品添加剂. 2017(02)
[2]信号肽及化学通透剂对环糊精葡萄糖基转移酶胞外分泌的影响[J]. 蔡海松,林晓栩,郭永华,陈龙军,张慧,邱宏端,林新坚,陈济琛. 微生物学通报. 2017(03)
[3]细菌麦芽糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的诱导型异源表达[J]. 杨韵霏,李由然,张梁,李赢,顾正华,丁重阳,石贵阳. 微生物学通报. 2017(02)
[4]无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株[J]. 张明俐,柳鹏福,史吉平,曾勇. 食品工业科技. 2016(14)
[5]信号肽对Bacillus subtilis表达环糊精葡萄糖基转移酶的影响[J]. 毛婷,李江华,刘龙,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2016(02)
[6]环糊精葡萄糖基转移酶的酿酒酵母表面展示及其生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸[J]. 熊艳军,宿玲恰,王蕾,吴敬,陈晟. 微生物学报. 2015(10)
[7]枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展[J]. 余小霞,田健,刘晓青,伍宁丰. 生物技术通报. 2015(02)
[8]枯草芽孢杆菌OKB105产生的surfactin防治烟草花叶病毒病及其机理研究[J]. 任鹏举,谢永丽,张岩,伍辉军,高学文. 中国生物防治学报. 2014(02)
[9]食品级枯草芽孢杆菌表达系统的最新研究进展[J]. 王金斌,陈大超,李文,蒋玮,李鹏,张倩倩,唐雪明. 上海农业学报. 2014(01)
[10]天然无序蛋白质:序列-结构-功能的新关系[J]. 黄永棋,刘志荣. 物理化学学报. 2010(08)
博士论文
[1]枯草芽孢杆菌及链霉菌表达系统的构建及应用研究[D]. 关成冉.江南大学 2016
[2]β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的分泌表达及其热稳定性研究[D]. 李才明.江南大学 2014
[3]枯草芽孢杆菌中Sec分泌途径底物特性及非经典分泌途径的研究[D]. 王光强.江南大学 2013
硕士论文
[1]Bacillus stearothermophilus环糊精葡萄糖基转移酶在短小芽孢杆菌中的重组表达、发酵优化及应用研究[D]. 范博望.江南大学 2016
本文编号：3372747
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