固体脂质纳米颗粒增强燕麦多肽在胃肠道中对二肽基肽酶Ⅳ的抑制作用

发布时间：2022-02-20 17:10

　　生物活性肽容易受到胃肠道蛋白酶和肽酶的降解,不能顺利到达靶组织发挥作用。本研究通过纳米包埋技术提高燕麦多肽在胃肠道中的稳定性,抑制燕麦多肽在胃肠道中的二次水解。具体结果如下:1.提取燕麦球蛋白组分,胰蛋白酶水解14 h和碱性蛋白酶水解2 h后的水解产物对DPP4均有良好的抑制作用,且具有浓度依赖型关系。利用碱性蛋白酶进行水解时能在较短时间内释放出更多的DPP4抑制肽,但切割位点不易控制,因此选择胰蛋白酶对燕麦球蛋白进行水解。2.对胰蛋白酶水解14 h后的水解产物进行电泳实验和水解度的测定。水解产物的分子量均在14 kDa以下,水解度为19.25%。对水解产物进行超滤,得到分子量小于3 kDa（Mw<3 kDa）的组分OGL和分子量在3 kDa-10 kDa之间的组分OGH（3 kDa<Mw<10 kDa）。研究了两种不同分子量的燕麦多肽对DPP4的抑制作用,发现OGL对DPP4的抑制作用较强,IC50值为0.12 mg/mL,OGH的IC50值为2.42 mg/mL。OGL和OGH的疏水性分别为40和79。3.利用固体脂质纳米颗粒（SLN）对两部分燕麦多肽进行包埋,并... 

【文章来源】：北京林业大学北京市211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 糖尿病及DPP4抑制剂
        1.1.1 糖尿病介绍及并发症
        1.1.2 GLP-1和DPP4
        1.1.3 药物型DPP4抑制剂
        1.1.4 天然DPP4抑制剂
        1.1.5 天然DPP4抑制肽
    1.2 生物活性肽
        1.2.1 生物活性肽
        1.2.2 生物活性肽生物利用度
        1.2.3 提高生物活性肽生物利用度的方法
    1.3 固体脂质纳米颗粒
        1.3.1 固体脂质纳米颗粒介绍
        1.3.2 SLN的优点
        1.3.3 SLN包埋研究进展
    1.4 燕麦DPP4抑制肽
        1.4.1 燕麦的营养价值
        1.4.2 燕麦球蛋白DPP4抑制肽研究进展
    1.5 本研究的研究内容及意义
2 燕麦蛋白DPP4抑制肽的制备及筛选
    2.1 材料与设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 燕麦脱脂粉制备
        2.2.2 燕麦蛋白提取
        2.2.3 考马斯亮蓝G-250测染色法定样品蛋白质含量
        2.2.4 燕麦蛋白的水解实验
            2.2.4.1 胰蛋白酶水解
            2.2.4.2 碱性蛋白酶的水解
            2.2.4.3 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
            2.2.4.4 水解度的测定
        2.2.5 燕麦多肽的制备
        2.2.6 DPP4抑制活性的测定
        2.2.7 表面疏水性测定
        2.2.8 氨基酸组成分析
        2.2.9 数据统计分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 燕麦中各组分的蛋白质含量
            2.3.1.1 标准曲线的绘制
            2.3.1.2 燕麦蛋白质提取率
        2.3.2 燕麦球蛋白的水解度
        2.3.3 燕麦球蛋白及其DPP4抑制肽的电泳图谱
        2.3.4 DPP4抑制肽的活性
        2.3.5 DPP4抑制肽的疏水性及氨基酸分析
    2.4 本章小结
3 SLN的制备特征及其稳定性
    3.1 材料与仪器设备
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 SLN的制备
        3.2.2 包埋率(EE)的测定
        3.2.3 SLN特征的测定
        3.2.4 透射电镜分析
        3.2.5 稳定性的评估
            3.2.5.1 pH稳定性
            3.2.5.2 储藏稳定性
            3.2.5.3 热处理稳定性
            3.2.5.4 紫外光照稳定性
        3.2.6 数据统计分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 SLN的特征
        3.3.2 OGL和OGH的包埋率(EE)
        3.3.3 透射电镜(TEM)
        3.3.4 纳米乳液的pH稳定性
        3.3.5 纳米乳液的储藏稳定性
        3.3.6 纳米乳液的热处理稳定性
        3.3.7 纳米乳液的紫外光照稳定性
    3.4 本章小结
4 OGB-SLN的模拟胃肠液稳定性及其机理
    4.1 材料与仪器设备
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 仪器设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 OGB和OGB-SLN的制备
        4.2.2 体外释放实验和DPP4抑制率的测定
        4.2.3 傅立叶变换红外光谱(FTIR)
        4.2.4 热重分析
        4.2.5 X射线衍射
        4.2.6 数据统计分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 模拟胃肠液释放和对DPP4的抑制率
        4.3.2 FTIR分析
        4.3.3 热稳定性
        4.3.4 X射线衍射
    4.4 本章小结
5 结论和展望
    5.1 结论
        5.1.1 制备燕麦球蛋白DPP4抑制肽
        5.1.2 SLN特征
        5.1.3 模拟胃肠液稳定性研究
        5.1.4 FTIR、TGA和XRD
    5.2 本研究的创新点
    5.3 展望
参考文献
个人简历
导师简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]现代医学与传统医学治疗2型糖尿病的临床应用研究[J]. 裴晶,暴梅佳.  卫生职业教育. 2019(03)
[2]难溶性药物与介孔二氧化硅纳米粒载体的相互作用对于释放速率的影响[J]. 刘曈,万龙,王可可,王晓帆,曲红娥,姜明燕.  药物评价研究. 2018(10)
[3]生物活性肽功能及制备技术研究进展[J]. 余楠楠,陈琛.  中国酿造. 2018(09)
[4]基于体外释放的半固体制剂透皮吸收及其影响因素探讨[J]. 侯迪旭,吴学萍,李树英,梁林,何淑旺,王东凯.  中国新药杂志. 2018(15)
[5]不同单硬脂酸甘油酯含量的大豆油油凝胶性能和微观结构分析[J]. 刘盼盼,许苗苗,祁文静,陆兆新,吕凤霞,别小妹,张充,赵海珍.  南京农业大学学报. 2018(03)
[6]人参果皂苷前体阳离子脂质体的制备及体外释放研究[J]. 杜琳,刘知源,赵凌志.  吉林中医药. 2017(10)
[7]红细胞膜包裹PLGA纳米粒的制备和体外毒性及药物释放初探[J]. 孙雅楠,张秀梅,马欣,阙晓,苏靖,邱明丰.  中国新药杂志. 2017(19)
[8]姜黄素固体脂质纳米粒制备及体外释放的研究[J]. 李春华,刘志东,丁伶伶,黄瑞,王舒雅.  天津中医药大学学报. 2016(06)
[9]载美洲大蠊提取物纳米粒的表征及体外释放研究[J]. 黄丫丫,杨杭,林家莉,杨建香,甘昌敏,刘光明,李婧炜.  中草药. 2016(19)
[10]杨梅素脂质体的体外释放及体内吸收实验研究[J]. 钱俊青,黄琪,竺少敏.  浙江工业大学学报. 2016(04)

博士论文
[1]固体脂质纳米粒的小肠上皮细胞转运机制研究及其载体构建[D]. 柴桂宏.浙江大学 2016
[2]白藜芦醇纳米混悬剂改善口服生物利用度及经鼻脑靶向递药系统研究[D]. 郝吉福.山东大学 2015
[3]基于LyP-1介导淋巴转移肿瘤靶向的脂质体递药系统研究[D]. 闫志强.复旦大学 2011
[4]固体脂质纳米粒的制备和性能研究[D]. 侯冬枝.华中科技大学 2004

硕士论文
[1]固体脂质纳米颗粒包覆防晒剂的规律性研究[D]. 缪玉莲.上海应用技术大学 2016
[2]燕麦多肽的结构特征及DPP4抑制作用[D]. 王凤.北京林业大学 2016
[3]缬沙坦固体脂质纳米粒的研究[D]. 李先俊.浙江大学 2014
[4]纳米结构脂质载体的制备、表征及相关性质研究[D]. 王佳丽.中国农业科学院 2013



本文编号：3635484